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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 果蔬 » 关于果胶甲酯酶（PE）活性的测定
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windygo

木虫 (正式写手)

咸蛋超人

[求助] 关于果胶甲酯酶（PE）活性的测定 已有2人参与

测定方法：取酶提取液2mL，37℃预热3min，加入酚酞指示剂2滴，加1%果胶8mL，用0.01mol/ L NaOH溶液滴定至淡红色，记录30min内其保持淡红色所消耗的NaOH溶液的体积。原理是：NaOH溶液中和酶液催化果胶释放的CH3O。
假设，30min内，各各试验组所加的8mL 1%果胶的果胶就被酶液完全催化分解，那么产生的CH3O就会成为一个固定值，那测定的结果就不怎么准确了。
还有，如果假设成立，那么在无法确定哪组酶液活性最高的情况下，怎么确定加入果胶的含量？
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我已经开始怀念那些人，那些事了~
1楼 2015-01-23 16:11:21
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99503102

版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
windygo: 金币+5, ★有帮助 2015-01-24 10:54:18
windygo: 金币+5, ★有帮助 2015-01-26 09:32:22
楼主挺有想法的，但是我觉得你还是先把实验做一遍，看看实验结果是否和你假设的一样，很多东西实际上并不是我们想的那样的。当然，如果结果确实如楼主假设，大可添加果胶量，具体多少无所谓，但各个样品的添加量必须是一样的。
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微信公众号：食安小屋
2楼2015-01-24 01:27:25
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windygo

木虫 (正式写手)

咸蛋超人
引用回帖:
2楼: Originally posted by 99503102 at 2015-01-24 01:27:25
楼主挺有想法的，但是我觉得你还是先把实验做一遍，看看实验结果是否和你假设的一样，很多东西实际上并不是我们想的那样的。当然，如果结果确实如楼主假设，大可添加果胶量，具体多少无所谓，但各个样品的添加量必 ...

做了一组，待滴加NaOH溶液呈微红色5min后（在30min内），我又加了一些果胶溶液，结果红色消失。是否可以验证我上面的假设？
如果我在试验开始前，均将酶液稀释同样倍数，然后其余方法不变，那应该不会影响结果吧？
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我已经开始怀念那些人，那些事了~
3楼2015-01-24 08:08:27
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答非所问

荣誉版主 (职业作家)

ET.....

优秀版主

【答案】应助回帖

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windygo: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-01-25 10:24:17
测酶活的时候有一个前提，底物一般是过量的，没有这个前提，各种假设都行不通~~~~~也就也是说，你的底物的量一定要多于30min酶解的量，还有你的酶的浓度你是可以调整的（稀释？），调整到一个适合的浓度。你就不需要调整果胶的浓度了
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4楼2015-01-24 10:19:25
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windygo

木虫 (正式写手)

咸蛋超人
引用回帖:
4楼: Originally posted by 答非所问 at 2015-01-24 10:19:25
测酶活的时候有一个前提，底物一般是过量的，没有这个前提，各种假设都行不通~~~~~也就也是说，你的底物的量一定要多于30min酶解的量，还有你的酶的浓度你是可以调整的（稀释？），调整到一个适合的浓度。你就不需要 ...

又出现个问题，我按照原方法又测定了三组，加上昨天测的一组，共四组数据（均属于不同试验组），当滴定至呈现微红色不变时，所消耗的NaOH溶液的量是不一样的。最多的和最小的差别3mL。
滴定至微红色后，我滴加果胶溶液，红色仍会消失，说明酶液仍然存在，但是为什么中和酶液催化相同果胶溶液释放的CH3O，所消耗的NaOH溶液量不一样呢？
我要纠结疯了~
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我已经开始怀念那些人，那些事了~
5楼2015-01-24 10:53:11
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答非所问

荣誉版主 (职业作家)

ET.....

优秀版主
引用回帖:
5楼: Originally posted by windygo at 2015-01-24 10:53:11
又出现个问题，我按照原方法又测定了三组，加上昨天测的一组，共四组数据（均属于不同试验组），当滴定至呈现微红色不变时，所消耗的NaOH溶液的量是不一样的。最多的和最小的差别3mL。
滴定至微红色后，我滴加果胶 ...

亲，一般以你这种方法测得，都需要灭酶，文献中提到了这个问题吗？？酶活只是没催化的速率！！！
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6楼2015-01-24 21:01:03
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