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windygo

木虫 (正式写手)

咸蛋超人

[求助] 关于果胶甲酯酶(PE)活性的测定 已有2人参与

测定方法:取酶提取液2mL,37℃预热3min,加入酚酞指示剂2滴,加1%果胶8mL,用0.01mol/ L NaOH溶液滴定至淡红色,记录30min内其保持淡红色所消耗的NaOH溶液的体积。原理是:NaOH溶液中和酶液催化果胶释放的CH3O。
假设,30min内,各各试验组所加的8mL 1%果胶的果胶就被酶液完全催化分解,那么产生的CH3O就会成为一个固定值,那测定的结果就不怎么准确了。
还有,如果假设成立,那么在无法确定哪组酶液活性最高的情况下,怎么确定加入果胶的含量?
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我已经开始怀念那些人,那些事了~
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99503102

版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
windygo: 金币+5, 有帮助 2015-01-24 10:54:18
windygo: 金币+5, 有帮助 2015-01-26 09:32:22
楼主挺有想法的,但是我觉得你还是先把实验做一遍,看看实验结果是否和你假设的一样,很多东西实际上并不是我们想的那样的。当然,如果结果确实如楼主假设,大可添加果胶量,具体多少无所谓,但各个样品的添加量必须是一样的。
微信公众号:食安小屋
2楼2015-01-24 01:27:25
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windygo

木虫 (正式写手)

咸蛋超人

引用回帖:
2楼: Originally posted by 99503102 at 2015-01-24 01:27:25
楼主挺有想法的,但是我觉得你还是先把实验做一遍,看看实验结果是否和你假设的一样,很多东西实际上并不是我们想的那样的。当然,如果结果确实如楼主假设,大可添加果胶量,具体多少无所谓,但各个样品的添加量必 ...

做了一组,待滴加NaOH溶液呈微红色5min后(在30min内),我又加了一些果胶溶液,结果红色消失。是否可以验证我上面的假设?
如果我在试验开始前,均将酶液稀释同样倍数,然后其余方法不变,那应该不会影响结果吧?
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3楼2015-01-24 08:08:27
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答非所问

荣誉版主 (职业作家)

ET.....

优秀版主

【答案】应助回帖

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windygo: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-01-25 10:24:17
测酶活的时候有一个前提,底物一般是过量的,没有这个前提,各种假设都行不通~~~~~也就也是说,你的底物的量一定要多于30min酶解的量,还有你的酶的浓度你是可以调整的(稀释?),调整到一个适合的浓度。你就不需要调整果胶的浓度了
获取网盘密码请点击:http://emuch.net/bbs/box.php(复制之后,黏贴到浏览器地址栏)
4楼2015-01-24 10:19:25
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windygo

木虫 (正式写手)

咸蛋超人

引用回帖:
4楼: Originally posted by 答非所问 at 2015-01-24 10:19:25
测酶活的时候有一个前提,底物一般是过量的,没有这个前提,各种假设都行不通~~~~~也就也是说,你的底物的量一定要多于30min酶解的量,还有你的酶的浓度你是可以调整的(稀释?),调整到一个适合的浓度。你就不需要 ...

又出现个问题,我按照原方法又测定了三组,加上昨天测的一组,共四组数据(均属于不同试验组),当滴定至呈现微红色不变时,所消耗的NaOH溶液的量是不一样的。最多的和最小的差别3mL。
滴定至微红色后,我滴加果胶溶液,红色仍会消失,说明酶液仍然存在,但是为什么中和酶液催化相同果胶溶液释放的CH3O,所消耗的NaOH溶液量不一样呢?
我要纠结疯了~
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5楼2015-01-24 10:53:11
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答非所问

荣誉版主 (职业作家)

ET.....

优秀版主

引用回帖:
5楼: Originally posted by windygo at 2015-01-24 10:53:11
又出现个问题,我按照原方法又测定了三组,加上昨天测的一组,共四组数据(均属于不同试验组),当滴定至呈现微红色不变时,所消耗的NaOH溶液的量是不一样的。最多的和最小的差别3mL。
滴定至微红色后,我滴加果胶 ...

亲,一般以你这种方法测得,都需要灭酶,文献中提到了这个问题吗??酶活只是没催化的速率!!!
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6楼2015-01-24 21:01:03
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