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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求大神帮我看看这电泳图，问题出在哪儿啊
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mengzhiyishe

铁虫 (初入文坛)

[求助] 求大神帮我看看这电泳图，问题出在哪儿啊 已有3人参与

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求大神帮我看看这电泳图，问题出在哪儿啊
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1楼 2015-01-08 19:15:23
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翼在天

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
mengzhiyishe(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-08 20:47:43
一个可能是循环次数多，导致非特异性条带多，拖尾
还有可能就是跑胶时候电压太高。
你重新PCR试试吧
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2楼2015-01-08 19:48:29
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aotoulan

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
3楼2015-01-08 21:31:14
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mengzhiyishe

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by aotoulan at 2015-01-08 21:31:14
左起第二泳道是Marker吗？这都没跑好，大概1%的胶吧，可以选择换新的电泳液低电压80V跑看看，顺便问下为什么退火时间那么长呢，一般30s

百分之1.5的胶，退火时间神马的都是看的论文！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2015-01-08 21:46:20
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mengzhiyishe

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by aotoulan at 2015-01-08 21:31:14
左起第二泳道是Marker吗？这都没跑好，大概1%的胶吧，可以选择换新的电泳液低电压80V跑看看，顺便问下为什么退火时间那么长呢，一般30s

marker没跑好是因为电压太高么？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2015-01-08 21:47:28
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zliean

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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mengzhiyishe: 金币+4, ★★★很有帮助 2015-01-09 09:12:33
1、你胶浓度太大 0.5％就行 分离大片段得小点浓度 要不然大片段跑不开 我分离2k-5k就这个浓度 效果很好 不是你电压的事 我130V也没跑成这样
2、延伸时间太短  目的片段大小和延伸时间正比 看你这大小 估计得两分钟才合适
3、退火温度可能不好 做个梯度pcr找找最合适的温度  文献只能参考 不同实验环境 对结果影响也挺大

[ 发自小木虫客户端 ]
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6楼2015-01-09 02:08:48
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mengzhiyishe

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by zliean at 2015-01-09 02:08:48
1、你胶浓度太大 0.5％就行 分离大片段得小点浓度 要不然大片段跑不开 我分离2k-5k就这个浓度 效果很好 不是你电压的事 我130V也没跑成这样
2、延伸时间太短  目的片段大小和延伸时间正比 看你这大小 估计得两分钟 ...

谢谢你
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7楼2015-01-09 09:11:39
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素锦流年wang

新虫 (小有名气)
模板是什么？用什么抽屉方法？很可能是模板不纯造成的。
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唯有努力才是永恒的需求，你若盛开，蝴蝶自来。
8楼2015-01-12 09:45:01
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