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mengzhiyishe

铁虫 (初入文坛)

[求助] 求大神帮我看看这电泳图,问题出在哪儿啊 已有3人参与

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求大神帮我看看这电泳图,问题出在哪儿啊
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翼在天

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
mengzhiyishe(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-08 20:47:43
一个可能是循环次数多,导致非特异性条带多,拖尾
还有可能就是跑胶时候电压太高。
你重新PCR试试吧
2楼2015-01-08 19:48:29
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aotoulan

禁虫 (小有名气)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

3楼2015-01-08 21:31:14
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mengzhiyishe

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by aotoulan at 2015-01-08 21:31:14
左起第二泳道是Marker吗?这都没跑好,大概1%的胶吧,可以选择换新的电泳液低电压80V跑看看,顺便问下为什么退火时间那么长呢,一般30s

百分之1.5的胶,退火时间神马的都是看的论文!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2015-01-08 21:46:20
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mengzhiyishe

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by aotoulan at 2015-01-08 21:31:14
左起第二泳道是Marker吗?这都没跑好,大概1%的胶吧,可以选择换新的电泳液低电压80V跑看看,顺便问下为什么退火时间那么长呢,一般30s

marker没跑好是因为电压太高么?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2015-01-08 21:47:28
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zliean

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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mengzhiyishe: 金币+4, ★★★很有帮助 2015-01-09 09:12:33
1、你胶浓度太大 0.5%就行 分离大片段得小点浓度 要不然大片段跑不开 我分离2k-5k就这个浓度 效果很好 不是你电压的事 我130V也没跑成这样
2、延伸时间太短  目的片段大小和延伸时间正比 看你这大小 估计得两分钟才合适
3、退火温度可能不好 做个梯度pcr找找最合适的温度  文献只能参考 不同实验环境 对结果影响也挺大

[ 发自小木虫客户端 ]
6楼2015-01-09 02:08:48
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mengzhiyishe

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by zliean at 2015-01-09 02:08:48
1、你胶浓度太大 0.5%就行 分离大片段得小点浓度 要不然大片段跑不开 我分离2k-5k就这个浓度 效果很好 不是你电压的事 我130V也没跑成这样
2、延伸时间太短  目的片段大小和延伸时间正比 看你这大小 估计得两分钟 ...

谢谢你
7楼2015-01-09 09:11:39
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素锦流年wang

新虫 (小有名气)

模板是什么?用什么抽屉方法?很可能是模板不纯造成的。
唯有努力才是永恒的需求,你若盛开,蝴蝶自来。
8楼2015-01-12 09:45:01
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