| 查看: 1302 | 回复: 2 | |||
IMichaelhan木虫 (小有名气)
|
[求助]
mtDNA提取问题已有1人参与
|
|
试剂： 溶液A:含Tris-HCl 10mmol/L, NaCl 10mmol/L, MgCl2 5mmol/L， pH7.5; 溶液B:Tris-HCl 10mmol/L, NaCl 400mmol/L,EDTA 2mmol/L， pH8.0; 10%SDS溶液 提取步骤： 1、取冷冻组织用液氮研磨,加入溶液A 500ul, 混匀, 2000r/min,10min,弃上清。 2、沉淀加溶液B 500ul, 混匀, 3500r/min,10min,弃上清。 3、沉淀加溶液B 100ul,混匀后加入蛋白酶K 5ul和10%SDS 20ul, 快速混匀。40℃过夜或50℃4h。 4、加入50ul饱和醋酸钠,混匀,轻摇15S。15000r/min, 4℃, 15min,取上清液。 5、重复步骤4 6、取上清，加入等体积酚∶氯仿∶异醇(25∶24∶1),温和振荡5min, 10000r/min,10min, 4℃ 7、重复步骤6 8、加入2倍体积冰乙醇冰浴30min, 15000r/min, 10min, 弃上清。 9、用70%冰乙醇漂洗沉淀,15000r/min, 2min, 彻底去上清。沉淀于空气中干燥25min, 加入适量50ul ddH2O液溶解。贮于4℃ 我提取的是动物的mtDNA，郁闷的是提了好几次，OD值1.8-2.0之间，浓度也可以，但是电泳检测之后没有目的条带，降解也很严重，问题出在哪啊？破碎组织时试过用剪刀、电动研磨棒、液氮研磨，结果没有目的条带，每一步我都是在冰上做的，也一样。我觉得总归是DNA，没那么容易降解吧。还是我的方法出了错，请高手指点 |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有54人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
gDNA与基因组DNA的区别
已经有8人回复- 50mmol/LTris-HCl缓冲液(pH8.2)怎么配
已经有4人回复
- ITS内转录间隔区交流帖
已经有4人回复
- 昆虫DNA提取，没结果啊！
已经有8人回复
- 鱼类线粒体DNA的提取
已经有6人回复
- Ti农杆菌转化植物基因组，有没有可能把目的T-DNA转化到线粒体基因组上？？？？！！！
已经有6人回复
- 大家看我这条件是不是很悬
已经有11人回复
- mtDNA图像检测不理想，求原因
已经有18人回复
- 求助叶绿体线粒体分离提取
已经有11人回复
- 有做AFLP的么？
已经有6人回复
- 小腿血管突然断裂是什么原因？
已经有3人回复
- 【讨论】目标检测中，分类训练样本和待检测图像的目标大小不一，怎么解决？（顶贴也送
已经有57人回复
- 【求助】最近导师让做负压精馏的中式实验，高手指点下用什么物系比较理想
已经有6人回复
- 生物信息学专题－生物版，医学版和信息科学版共同创建
已经有87人回复
xuxiaokun313
新虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1355.6
- 帖子: 83
- 在线: 88.3小时
- 虫号: 1329277
- 注册: 2011-06-23
- 性别: GG
- 专业: 病原细菌与放线菌生物学
2楼2015-06-16 22:31:57
3楼2016-03-04 11:47:03