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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 需要做一段120-150bp的双链DNA
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

[求助] 需要做一段120-150bp的双链DNA 已有1人参与

需要做一段120-150bp的双链DNA，没有模板可以用
公司说最多只能合成60nt的单链，怎么设计PCR反应把这个双链扩出来呢？引物用多少没关系，步骤不要太多
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
1楼 2014-12-16 06:25:06
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小小cool

金虫 (正式写手)
这个直接全基因合成就行啊，我们可以的

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2楼2014-12-16 07:40:50
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小小cool at 2014-12-15 11:40:50
这个直接全基因合成就行啊，我们可以的

我老板是铁公鸡啊~~~伊肯定不会让我去找公司做合成的
最简单的方法当然是随便找个双链的片段，然后一点点接引物往外延长出去~
最后再把延长出来的片段单独扩出来，只是觉得太麻烦了
大片段连接也做过，只是这片段实在是不大不小
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
3楼2014-12-16 12:13:14
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gangouyang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
fuyuandj86: 金币+20, ★★★很有帮助 2014-12-17 00:55:22
三条60bp的单链，1和3是正链，2是反链，注意需要overlap，1和2退火，再1+2和3退火，可以得到类似双链的模板产物，用此产物作模板，注意不要做胶收回。
再用一对引物，PCR，应该是可以达到目的的。
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4楼2014-12-16 14:41:27
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小小cool

金虫 (正式写手)
嗯，楼上的方法很好啊，可以试试

[ 发自手机版 https://muchong.com/3g ]
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5楼2014-12-16 18:47:32
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