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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

[求助] 需要做一段120-150bp的双链DNA已有1人参与

需要做一段120-150bp的双链DNA,没有模板可以用
公司说最多只能合成60nt的单链,怎么设计PCR反应把这个双链扩出来呢?引物用多少没关系,步骤不要太多
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
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小小cool

金虫 (正式写手)

这个直接全基因合成就行啊,我们可以的

[ 发自手机版 https://muchong.com/3g ]
2楼2014-12-16 07:40:50
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小小cool at 2014-12-15 11:40:50
这个直接全基因合成就行啊,我们可以的

我老板是铁公鸡啊~~~伊肯定不会让我去找公司做合成的
最简单的方法当然是随便找个双链的片段,然后一点点接引物往外延长出去~
最后再把延长出来的片段单独扩出来,只是觉得太麻烦了
大片段连接也做过,只是这片段实在是不大不小
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
3楼2014-12-16 12:13:14
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gangouyang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
fuyuandj86: 金币+20, ★★★很有帮助 2014-12-17 00:55:22
三条60bp的单链,1和3是正链,2是反链,注意需要overlap,1和2退火,再1+2和3退火,可以得到类似双链的模板产物,用此产物作模板,注意不要做胶收回。
再用一对引物,PCR,应该是可以达到目的的。
4楼2014-12-16 14:41:27
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小小cool

金虫 (正式写手)

嗯,楼上的方法很好啊,可以试试

[ 发自手机版 https://muchong.com/3g ]
5楼2014-12-16 18:47:32
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