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windflower63

铜虫 (小有名气)

[交流] 25ulPCR体系如何优化到10ul 已有3人参与

最近在做PCR，扩增片段为1kb左右，想把25ul体系优化到10ul，把buffer、镁离子和dNTP试了多个浓度，也没试出来，不知道那位大哥大姐之前做过相关的工作，请给小妹指点迷津，不甚感激，谢谢！！
25ul体系如下：
10×buffer                 2.5ul
Mg离子(25mM)         1.5ul
dNTP (2.5mM)           2ul
正引物(10uM)            1ul
反引物 (10uM)           1ul
DNA模版 （2.5U/ul)   2ul
酶                              1ul
dd水                          14ul
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1楼 2014-12-04 16:30:41
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董博士

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-12-04 19:49:28
10ul体系如下：
10×buffer                 1ul
Mg离子(25mM)          1ul
dNTP (2.5mM)           0.5ul
正引物(10uM)            0.25ul
反引物 (10uM)           0.25ul
DNA模版 （2.5U/ul)    0.5ul
酶                            0.25ul
dd水                         6.25ul
这是大概的，具体操作还是要看实际情况，模板量和dNTP量可以适当改变
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医学&统计学
2楼2014-12-04 18:46:39
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soarrow

铁杆木虫 (正式写手)

酱油歪楼党
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
现在市场上有很多PCR反应的预混液，多数是2X的，而且大多数扩增基本不需要做太多优化

10ul体系可以
2X Mix  5ul
引物    1+1ul
模板    1-3ul
补无核酶水至10ul
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2014-12-06 00:58:11
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oO晶锅Oo

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果你做的25 uL的体系反应结果满意的话，只需要把所加试剂体积变为原体积的2/5，或者把2分25 uL的体系加一个EP管里，分成5份就可以啦。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2014-12-07 00:44:45
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