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windflower63

铜虫 (小有名气)

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[交流] 25ulPCR体系如何优化到10ul 已有3人参与

最近在做PCR，扩增片段为1kb左右，想把25ul体系优化到10ul，把buffer、镁离子和dNTP试了多个浓度，也没试出来，不知道那位大哥大姐之前做过相关的工作，请给小妹指点迷津，不甚感激，谢谢！！
25ul体系如下：
10×buffer                2.5ul
Mg离子(25mM)       1.5ul
dNTP (2.5mM)          2ul
正引物(10uM)          1ul
反引物 (10uM)          1ul
DNA模版（2.5U/ul) 2ul
酶                            1ul
dd水                         14ul

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1楼 2014-12-04 16:30:41

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董博士

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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-12-04 19:49:28

10ul体系如下：
10×buffer                1ul
Mg离子(25mM)       1ul
dNTP (2.5mM)          0.5ul
正引物(10uM)          0.25ul
反引物 (10uM)          0.25ul
DNA模版（2.5U/ul) 0.5ul
酶                         0.25ul
dd水                      6.25ul
这是大概的，具体操作还是要看实际情况，模板量和dNTP量可以适当改变