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lixiaoyi1981荣誉版主 (正式写手)
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5月份疑难问题汇总，请高手解答。
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reasonspare
木虫 (著名写手)
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lixiaoyi1981(金币+10,VIP+0):好详细，第一个“搬城门木头”的人，重奖。谢谢
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顶一下斑斑": 问题 16: 关于PAGE的3个问题 用水、盐、和醇分别提取的植物种子的蛋白 1、有听说溴酚兰点在电极缓冲液中的吗？我一直点在样品里，现在有点在电极缓冲液中的，对其原理和操作，很不明白 答:有这种情况,溴芬兰无论在点样空,还是在buffer 都是一样的原理,都是起到知识的作用, 通常大家都喜欢和样品混合一起点到样孔,但是有些人考虑到 page的胶孔透光性很强,很难点样,何容易串样,所以在整个buffer中加入溴芬兰,这样的效果是的点样井清晰可见. 而且对电泳没有任何影响. 2、胶跑的过程中不直，是怎么回事？ 两个问题: 1 胶的pH和电泳buffer的pH 2, 电泳过程产生大量热, 胶表面受热不均匀. 3、跑完洗脱后，发现刚开始进入分离胶的地方，谱带呈栅栏状，再往下就没事了，是怎么回事？ 答:没有明白: 既然跑完,那就是溴芬兰到胶底部,你怎么就能看到物质刚到分离胶的位置, 如果你能看到物质的位置,我们就不需要染色了. 图谱栅栏状,最大可能就是TBE有问题,离子强度有问题,或者使用不纯的水. 什么叫下面没事了,不知所云. |
2楼2008-05-20 08:57:48
reasonspare
木虫 (著名写手)
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3楼2008-05-20 09:03:53
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andyhu2001
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lixiaoyi1981(金币+5,VIP+0):谢谢，最近有些忙，给金币晚了。对不住
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问题12： 我也遇到了这个问题，个人觉得一下的说法比较有道理 加药筛选约6天左右，细胞会大量死亡，孔中只剩下的细胞寥寥无几。这时会出现两个问题： 1.死亡的细胞会裂解释放出有害物质，导致那些有neo表达的阳性细胞死亡，即非选择性死亡。 2.孔中细胞数目很少，细胞之间的信号会变得很弱，也会导致阳性细胞的状态不佳甚至死亡。 以下是建议的解决方法仅供参考： 这个时候需要一种特殊的培养液：细胞汇合度达到80%的时候，换液，培养过夜之后收集培养液，通过滤器消毒，和新鲜的培养液按1：1混合备用。再转染后筛选过程中就可以应用这种培养基。 |
7楼2008-05-26 22:25:27
neuron2004
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8楼2008-06-14 23:52:32
9楼2008-06-16 11:20:19
10楼2008-06-16 11:29:47