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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于PAGE的3个问题
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惰惰228

银虫 (小有名气)

[交流] 关于PAGE的3个问题

用水、盐、和醇分别提取的植物种子的蛋白
1、有听说溴酚兰点在电极缓冲液中的吗？我一直点在样品里，现在有点在电极缓冲液中的，对其原理和操作，很不明白
2、胶跑的过程中不直，是怎么回事？
3、跑完洗脱后，发现刚开始进入分离胶的地方，谱带呈栅栏状，再往下就没事了，是怎么回事？
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1楼 2008-05-13 22:45:06
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w.king124

金虫 (正式写手)
★
xyklmu(金币+1,VIP+0):积极交流奖
1：我猜可能是BN电泳吧，(blue native),不过BN是将CBB加在缓冲液中
2：可能是正负电极不对称吧
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2楼2008-06-21 16:52:36
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xyklmu

至尊木虫 (知名作家)

虫眼看世界
★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):斑斑捧场，蓬荜生辉。
1、说的很不清楚，不明白你是如何做的。也有把溴酚兰点在电泳缓冲液中的，那是点在未上样的胶孔里面，这样整个胶在电泳时的电流比较均衡，电泳过程中条带会跑的相对齐平一些。
2、主要是你的上样中含有的蛋白量不同，或者处理过程中的盐浓度不一致，导致胶上泳道之间的电流大小不均一而早成功的。这样的话需要注意在跑蛋白电泳的前准确地定量蛋白的浓度。
3、不知道你说的是什么情况，有可能跟浓缩胶和分离胶的界面不是特别的齐有关，以后可以搞个照片上来看看
希望能够对你有帮助。
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位卑未敢忘忧国。
3楼2008-07-14 23:09:51
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ziman2003

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
xyklmu(金币+3,VIP+0):积极交流奖
我们实验室的做法是：
1、配胶
2、加入等体积（样品 体积）的2xSDS上样缓冲液，混匀，沸水煮5-10分钟。取出准备上样。
3、将配好的交织与电泳液中，避免两层玻璃板间有气泡。
4、上样品。
5、电压70-80v，跑过浓缩胶后，150-160v的跑。大概1个小时就下来了。我们的电泳板是小板子。所以跑得比较快。
6、小心取下PAGE胶，放入染色液中，在摇床上染色1个小时。后脱色。
7、观察结果
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4楼2008-08-27 14:35:35
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