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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 双向电泳后银染问题！！！
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yeying

金虫 (小有名气)

[交流] 双向电泳后银染问题！！！

本人最近做银染时都是染成了图2中的黑色，可是其他同学却是染出了淡黄色。
可是前一段时间我做一样的样品（只是材料的时期不一样）染出了淡黄色，图1。还有的问题就是有图2中有些蛋白点没有好像没有染出来，出现了白点。这是为什么？
Q:如何去除电泳中的横纹？
为什么在碱性端经常会出现Marker一样的拖带（图1）？
请高手指教！
[search]双向电泳[/search]

[ Last edited by 350784478 on 2009-7-12 at 09:16 ]
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1楼 2008-05-01 01:11:03
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taotao4108

金虫 (正式写手)

无理
呵呵，虽然你的问题我不能解答，但是还是要赞一下，图跑的不错，呵呵
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2楼2008-05-01 01:22:30
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yeshengxue

图是跑的还可以，横向拖尾可能跟平衡时间短有关
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3楼2008-05-24 19:57:30
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sunymor

铁虫 (初入文坛)
本人最近做银染时都是染成了图2中的黑色，可是其他同学却是染出了淡黄色。
可是前一段时间我做一样的样品（只是材料的时期不一样）染出了淡黄色，图1。还有的问题就是有图2中有些蛋白点没有好像没有染出来，出现了白点。这是为什么？
Q:如何去除电泳中的横纹？
为什么在碱性端经常会出现Marker一样的拖带（图1）？
请高手指教！

第一感觉是你的样品杂质可能比较多，横纹的出现主要是因为IEF聚焦不充分，碱性区域出现模糊也许是因为你的蛋白提取液里面含有SDS或其他某种去污剂没有除净
拖带可能是你的胶条PH范围比较窄（4-7等）这样在酸性端和碱性端的蛋白质就会在IEF时聚集在电极两端，尤其是> 7的那部分蛋白比较多。跑第二向时候那些聚集的高丰度蛋白就会出现图中的效果。
最好的办法是优化样品制备，样品制备好电泳结果经常是比较好看的
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4楼2008-05-25 17:34:31
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asaboy

金虫 (小有名气)
本人最近做银染时都是染成了图2中的黑色，可是其他同学却是染出了淡黄色
银染是黑色的才是对的，淡黄色可定义为银染时染色失败！
90%的可能都是水质的原因，实验室的净水机的水质长时间使用不稳定，建议直接购买瓶装的纯静水做银染！
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5楼2008-05-27 11:00:24
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playboy723

金虫 (正式写手)
染成黑色可能是你的硝酸银被氧化的缘故  可能在你操作过程中或者银氨溶液配置的有问题  问问其他人染液的配方吧
你的第一向聚的很不好   拖尾太严重了   优化一下聚焦条件吧
至于白点  我做的时候也遇到过   原因我也不清楚   可能是盐或者其他什么污染吧  希望有高人能解释一下
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6楼2008-05-28 19:34:26
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北国佳人

铜虫 (小有名气)

我来答答

★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢回贴交流 7-12 16:05
1.碱性段出现横纹,现在就技术上仍解决不了: DTT 在IEF 电离导致.另一原因是上样量多,也易出现横纹.
2.注意蛋白样品制备,杂质不能有, 否则银染时很容易看到横向\纵向拖尾.
3.平衡时间掌握好,否则也容易出现横向\纵向拖尾
4.银染过程注意器皿的干净,相关试剂配置用超纯水配置
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努力的小蜜蜂
7楼2008-06-16 15:44:03
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阿月浑子

银虫 (小有名气)
我现在 要搞这些东西  心里还有障碍 以前一点都没做过
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8楼2008-06-30 00:42:06
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢回贴交流 7-12 16:05
有横纹跟银染没有关系的，这个跟你配胶的质量，跑电泳的条件，还有样品的浓度，上样量等有观！配胶的质量我就不说了，跑电泳的条件一般情况下电流不要太高，太高了可能跑的太快，差别小的蛋白分不开，但以不能太小，太小了热效应太明显，跑出来的条带模糊；样品浓度大上样量多就会出现分不开，就是一片黑糊糊的那种现象，这时可以减少上样量试试
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9楼2008-09-03 13:51:38
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