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双向电泳后银染问题！！！
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本人最近做银染时都是染成了图2中的黑色，可是其他同学却是染出了淡黄色。 可是前一段时间我做一样的样品（只是材料的时期不一样）染出了淡黄色，图1。还有的问题就是有图2中有些蛋白点没有好像没有染出来，出现了白点。这是为什么？ Q:如何去除电泳中的横纹？ 为什么在碱性端经常会出现Marker一样的拖带（图1）？ 请高手指教！ [search]双向电泳[/search] [ Last edited by 350784478 on 2009-7-12 at 09:16 ] |
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8楼2008-06-30 00:42:06
taotao4108
金虫 (正式写手)
无理
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1394.8
- 帖子: 569
- 在线: 22.5小时
- 虫号: 452614
- 注册: 2007-11-05
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
2楼2008-05-01 01:22:30
3楼2008-05-24 19:57:30
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本人最近做银染时都是染成了图2中的黑色，可是其他同学却是染出了淡黄色。 可是前一段时间我做一样的样品（只是材料的时期不一样）染出了淡黄色，图1。还有的问题就是有图2中有些蛋白点没有好像没有染出来，出现了白点。这是为什么？ Q:如何去除电泳中的横纹？ 为什么在碱性端经常会出现Marker一样的拖带（图1）？ 请高手指教！ 第一感觉是你的样品杂质可能比较多，横纹的出现主要是因为IEF聚焦不充分，碱性区域出现模糊也许是因为你的蛋白提取液里面含有SDS或其他某种去污剂没有除净 拖带可能是你的胶条PH范围比较窄（4-7等）这样在酸性端和碱性端的蛋白质就会在IEF时聚集在电极两端，尤其是> 7的那部分蛋白比较多。跑第二向时候那些聚集的高丰度蛋白就会出现图中的效果。 最好的办法是优化样品制备，样品制备好电泳结果经常是比较好看的 |
4楼2008-05-25 17:34:31
