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yangym1123木虫 (小有名气)
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[交流]
核蛋白的透析和去除非特异性
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各位高手： 想请教一下，我现在在做蛋白方面的实验，有很多东西不是很懂，如果有问的比较低级的问题不要鄙视我~~：） 我用凯基公司的胞质蛋白和 核蛋白提取试剂盒提取了性腺的核蛋白，之后有5-6ml的总体积做透析，可是在透析的过程中不断的产生絮状沉淀，这是怎么回事啊，各位做的时候有碰到过吗？ 或者是你们用自配的溶液提取的核蛋白做透析也会发生这种情况吗？ 温度和PH会在透析的过程中产生很大的影响吗？ 还有就是提取到的核蛋白有什么方法处理一下能去掉大部分的组蛋白吗？ 因为后续实验不希望有大量组蛋白干扰。 PS: 1.试剂盒最后一部裂解核的溶液里面的盐离子是钠离子，浓度是500mM； 2.透析的条件是：4°，每次3-4小时，透析液为500ml PH8.0的20mM Tris-cl 1mM EDTA，内含钠离子浓度逐步下降分别是0.25---0.1---0.05---0.02---0.01---0mM 另外，还有一个问题想请教： 在EMSA中经常加入的poly dI-dC,加入的量是根据什么来定的，比例是多少？ 1.根据加入的DNA的量？ 2.根据加入的核提取物的量？ 3.根据反应的总体积，以最终浓度多少？ 4.若不是做EMSA实验，但是也是做核蛋白里面能跟特异片段结合的反应也可以参考EMSA 加poly dIdC的量吗？ Sample Text |
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