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three姚银虫 (小有名气)
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DGGE银染，泳道颜色为什么这么深？ 已有3人参与
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如下图，我这批样品的PCR条带不是特别亮，所以DGGE效果也不好，只能隐约看到一些很浅的条带，但是不知道为什么泳道的颜色特别深，尤其是顶部和底部颜色很深，还有之前一次做的条带很清晰，但是泳道颜色也很深，想请教一下是什么原因？我用的引物是f338-GC/r518，胶的浓度是8%，变性梯度40~65%，染色方法是银染法。具体染色过程是： 1.取下胶板后，放在塑料盘里，用去离子水把胶从玻璃板上洗下来，再多清洗一次（每次清洗1~2min） 2. 加250ml固定液（10%冰醋酸溶液）固定15min 3. 倒掉固定液，去离子水洗两次（每次1~2min） 4. 加250ml印染液（0.2%硝酸银溶液，用之前加200μL甲醛），轻轻摇动，染色15min 5. 倒掉印染液，去离子水洗两次（每次1~2min） 6. 加250ml显色液（1.5% NaOH溶液，用之前加1.25ml甲醛），轻轻摇动，直到条带清晰为止（15~20min） （所有溶液都没有重复利用，都是从事先配好的溶液里取的） 因为实验比较急，希望大家能提供一些合理的建议和可行的方法，多谢了！  这一次的结果  之前一次的结果，条带很清晰，但是泳道颜色还是很深 |
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Rubisco580
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three姚
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