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kakabada123

新虫 (初入文坛)

[求助] RNA一直提不好,都想退学了,跪求各位帮助 已有2人参与

传统trizol法提取RNA连续一个月了 总是提不好 有的时候是浓度超级低 就跟没有一样  有的时候是电泳图拖尾严重 有的时候是浓度挺好的,OD260/280也好,但是电泳图没有任何东西。
于是买了OMEGA试剂盒
试剂盒一到 昨晚就熬夜提
左一条带是传统法,左二条带是试剂盒
没有跑marker
帮我看看,
第一,按哪个方法提取合格,还是都不合格?
第二,这样的结果能不能往下做,想做Q-PCR
谢谢了!

RNA一直提不好,都想退学了,跪求各位帮助
电泳图.JPG
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小花猫阿

新虫 (小有名气)

RNA提取,一定要格外小心翼翼啊。
实验前所有用的东西包括桌子全部酒精擦一遍,保证无污染,试剂能用新的就用新的,带上口罩,离别人远点,给自己一个独立干净的空间很重要,最好自己一个封闭干净的空间。
15楼2014-11-11 12:59:25
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li245824369

木虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-11-07 21:47:43
你这提的是什么里的RNA啊?
2楼2014-11-07 19:44:00
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fuchange918

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-11-07 21:47:50
第一道,我貌似只看到了一条带,和第二道的相比较的话,应该是5s带,所以第一道的提取方法肯定不可以。
第二道,可以看出18s是28s亮度的2倍多,应该是降解严重(特殊物种除外),做Q-PCR需慎重。
3楼2014-11-07 20:31:54
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Neo2000

木虫 (著名写手)

连胶都没跑好,看来楼主有很多地方没做到位,留下QQ聊

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-11-07 22:34:38
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kakabada123

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-11-07 22:34:38
连胶都没跑好,看来楼主有很多地方没做到位,留下QQ聊

好的 您留下 我加您~
5楼2014-11-07 22:37:35
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kakabada123

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by fuchange918 at 2014-11-07 20:31:54
第一道,我貌似只看到了一条带,和第二道的相比较的话,应该是5s带,所以第一道的提取方法肯定不可以。
第二道,可以看出18s是28s亮度的2倍多,应该是降解严重(特殊物种除外),做Q-PCR需慎重。

第二道用的试剂盒 所以怀疑是不是匀浆时间有点长 用了大约3分钟 做普通PCR是可以的么
6楼2014-11-07 22:38:41
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kakabada123

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by li245824369 at 2014-11-07 19:44:00
你这提的是什么里的RNA啊?

腮腺 不知道内源性酶多不多
7楼2014-11-07 22:42:22
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fuchange918

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by kakabada123 at 2014-11-07 22:38:41
第二道用的试剂盒 所以怀疑是不是匀浆时间有点长 用了大约3分钟 做普通PCR是可以的么...

普通PCR可以试一下
8楼2014-11-08 08:45:33
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willychen34

木虫 (著名写手)

试剂盒啊~~~
所谓兵来将挡,水来土掩,总有一天,会实现的。
9楼2014-11-09 19:23:05
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quiller2000

木虫 (著名写手)

你要看看是不是你的材料一开始就降解了,材料如何保存的要考虑一下。

要是近,可以来我们组提,我们专门做RNA降解的
致良知
10楼2014-11-09 22:11:47
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