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234109770

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于液相色谱测定波长的问题已有4人参与

1.我在紫外跟光光度计上扫得全谱,确定了我测定物质的最大吸收峰。请问我测得的这个吸收峰能够应用在高效液相色谱紫外检测上吗?
如果不能,请问用安捷伦1200s的液相色谱仪器怎么测定最大吸收波长?能扫全谱吗?

2.我今天用这个波长在液相色谱机器上检测,完全没有吸收峰,重新配溶液也是,用的波长是买标准品的检测报告上的.
后来我用甲苯和苯测柱子柱效是正常的,刚买的新柱子,柱子应该没有问题 ,这可能是什么原因呀?

刚开始做液相色谱,请指教
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赈早见琥珀主

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
234109770: 金币+5 2014-12-25 11:48:12
DAD开全波长扫描在检测器设置里直接就能设,有一个波长选ALL就可以。没出峰可能是乙腈比例比较低,没冲出来导致的。尝试走一个大梯度,从5%升到95%看看大概需要多少比例的乙腈才能洗脱出来,然后再修正方法。
铁甲依然在
8楼2014-11-04 13:09:54
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klicking

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 234109770 at 2014-11-04 12:27:57
仪器带有DAD检测器,请问扫全谱的话具体怎么操作呀?

流动相我用的是梯度流动相,乙腈比例从9%升到34%,之前用PLUS C18的柱子可以做检测,现在用的XDB-C18反而测不出来了,...

agilent的检测器设置为记录全部数据,Waters的设置为采集3D光谱,其它的应该都有相应的设置。流动相乙腈比例偏小,建议设置更高的有机相比例试试看~~
归零
10楼2014-11-04 13:17:05
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普通回帖

klicking

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1:可以,仪器如果带有DAD或PDA检测器可以全扫光谱的;
2:推测是流动相比例不合适,可能没有出峰,可以尝试提高有机相比例试试。
归零
2楼2014-10-31 21:29:05
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芒果布丁牛奶

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
也可能是进样的浓度或者体积太小造成的。也可以把标品再做一次全扫确定最大吸收波长。还有,你确定你的检测器是开着的吗
3楼2014-10-31 21:58:59
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smart_phenol

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
费姚永芬: 金币+3, 周末愉快,谢谢交流 2014-11-01 10:59:10
要考虑一下你的物质使用现在的柱子进行测试是否合适哦。
come on with wonderful life.
4楼2014-11-01 10:31:11
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234109770

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by klicking at 2014-10-31 21:29:05
1:可以,仪器如果带有DAD或PDA检测器可以全扫光谱的;
2:推测是流动相比例不合适,可能没有出峰,可以尝试提高有机相比例试试。

仪器带有DAD检测器,请问扫全谱的话具体怎么操作呀?

流动相我用的是梯度流动相,乙腈比例从9%升到34%,之前用PLUS C18的柱子可以做检测,现在用的XDB-C18反而测不出来了,
5楼2014-11-04 12:27:57
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234109770

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 芒果布丁牛奶 at 2014-10-31 21:58:59
也可能是进样的浓度或者体积太小造成的。也可以把标品再做一次全扫确定最大吸收波长。还有,你确定你的检测器是开着的吗

开啦~样品的前10分钟和后十分钟都是有峰的,不过是杂峰。。

进样体积是20ul,浓度最高用的200ug/ml也没有峰,但是我们老板之前用这个柱子测的浓度比我的小都做出来了。。
6楼2014-11-04 12:29:40
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234109770

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by smart_phenol at 2014-11-01 10:31:11
要考虑一下你的物质使用现在的柱子进行测试是否合适哦。

用的C18色谱柱,标准品是多肽.
7楼2014-11-04 12:31:29
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赈早见琥珀主

木虫 (正式写手)

另,如果水相有缓冲盐的话乙腈比例就不要到95%了,80~90就可以了
铁甲依然在
9楼2014-11-04 13:11:58
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