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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 关于液相色谱测定波长的问题
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234109770

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于液相色谱测定波长的问题 已有4人参与

1.我在紫外跟光光度计上扫得全谱，确定了我测定物质的最大吸收峰。请问我测得的这个吸收峰能够应用在高效液相色谱紫外检测上吗？
如果不能，请问用安捷伦1200s的液相色谱仪器怎么测定最大吸收波长？能扫全谱吗？

2.我今天用这个波长在液相色谱机器上检测，完全没有吸收峰，重新配溶液也是，用的波长是买标准品的检测报告上的.
后来我用甲苯和苯测柱子柱效是正常的，刚买的新柱子，柱子应该没有问题 ，这可能是什么原因呀？

刚开始做液相色谱，请指教
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1楼 2014-10-31 21:14:30
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

赈早见琥珀主

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
234109770: 金币+5 2014-12-25 11:48:12
DAD开全波长扫描在检测器设置里直接就能设，有一个波长选ALL就可以。没出峰可能是乙腈比例比较低，没冲出来导致的。尝试走一个大梯度，从5%升到95%看看大概需要多少比例的乙腈才能洗脱出来，然后再修正方法。
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铁甲依然在
8楼2014-11-04 13:09:54
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klicking

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 234109770 at 2014-11-04 12:27:57
仪器带有DAD检测器，请问扫全谱的话具体怎么操作呀？

流动相我用的是梯度流动相，乙腈比例从9％升到34％，之前用PLUS C18的柱子可以做检测，现在用的XDB-C18反而测不出来了，...

agilent的检测器设置为记录全部数据，Waters的设置为采集3D光谱，其它的应该都有相应的设置。流动相乙腈比例偏小，建议设置更高的有机相比例试试看~~
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归零
10楼2014-11-04 13:17:05
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普通回帖

klicking

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1：可以，仪器如果带有DAD或PDA检测器可以全扫光谱的；
2：推测是流动相比例不合适，可能没有出峰，可以尝试提高有机相比例试试。
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归零
2楼2014-10-31 21:29:05
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芒果布丁牛奶

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
也可能是进样的浓度或者体积太小造成的。也可以把标品再做一次全扫确定最大吸收波长。还有，你确定你的检测器是开着的吗
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3楼2014-10-31 21:58:59
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smart_phenol

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
费姚永芬: 金币+3, 周末愉快，谢谢交流 2014-11-01 10:59:10
要考虑一下你的物质使用现在的柱子进行测试是否合适哦。
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come on with wonderful life.
4楼2014-11-01 10:31:11
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234109770

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by klicking at 2014-10-31 21:29:05
1：可以，仪器如果带有DAD或PDA检测器可以全扫光谱的；
2：推测是流动相比例不合适，可能没有出峰，可以尝试提高有机相比例试试。

仪器带有DAD检测器，请问扫全谱的话具体怎么操作呀？

流动相我用的是梯度流动相，乙腈比例从9％升到34％，之前用PLUS C18的柱子可以做检测，现在用的XDB-C18反而测不出来了，
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5楼2014-11-04 12:27:57
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234109770

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 芒果布丁牛奶 at 2014-10-31 21:58:59
也可能是进样的浓度或者体积太小造成的。也可以把标品再做一次全扫确定最大吸收波长。还有，你确定你的检测器是开着的吗

开啦~样品的前10分钟和后十分钟都是有峰的，不过是杂峰。。

进样体积是20ul，浓度最高用的200ug/ml也没有峰，但是我们老板之前用这个柱子测的浓度比我的小都做出来了。。
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6楼2014-11-04 12:29:40
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234109770

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by smart_phenol at 2014-11-01 10:31:11
要考虑一下你的物质使用现在的柱子进行测试是否合适哦。

用的C18色谱柱，标准品是多肽.
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7楼2014-11-04 12:31:29
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赈早见琥珀主

木虫 (正式写手)
另，如果水相有缓冲盐的话乙腈比例就不要到95%了，80~90就可以了
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铁甲依然在
9楼2014-11-04 13:11:58
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