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菌液PCR中没加片段和用水作对照都有条带，怎么解释？？？ 已有1人参与
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| 做连接时有对照没加片段和没加连接酶，涂板摇菌后菌液PCR都有条带，用水作模板也有条带，条带位置还是应有的位置，怎么解释？？？是什么东西污染了吗，怎么解决？ |
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3楼2014-10-20 19:02:49
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-10-19 00:32:26
yan342221: 金币+5 2014-10-20 19:03:04
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-10-19 00:32:26
yan342221: 金币+5 2014-10-20 19:03:04
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首先说没加连接酶，能想到的可能是楼主在载体的纯化中没割胶回收，导致没有被切割的载体一起混在最后的连接混合物中。所以如果不幸言中的话请楼主割胶回收酶处理过的载体。 然后是加水也能连上，当然上述没被切割的载体的污染也会导致这个问题，但更常见的原因是酶切过后的载体没经过去磷酸化（BAP或CIAP）处理，导致载体的自我连接（这种情况在单酶切下发生率很高！）。 |
2楼2014-10-18 22:43:43
4楼2014-10-20 23:24:19