应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌液PCR中没加片段和用水作对照都有条带，怎么解释？？？
41/1返回列表
查看: 2363  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yan342221

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌液PCR中没加片段和用水作对照都有条带，怎么解释？？？ 已有1人参与

做连接时有对照没加片段和没加连接酶，涂板摇菌后菌液PCR都有条带，用水作模板也有条带，条带位置还是应有的位置，怎么解释？？？是什么东西污染了吗，怎么解决？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-10-18 15:28:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

s_lich28

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-10-19 00:32:26
yan342221: 金币+5 2014-10-20 19:03:04
首先说没加连接酶，能想到的可能是楼主在载体的纯化中没割胶回收，导致没有被切割的载体一起混在最后的连接混合物中。所以如果不幸言中的话请楼主割胶回收酶处理过的载体。
然后是加水也能连上，当然上述没被切割的载体的污染也会导致这个问题，但更常见的原因是酶切过后的载体没经过去磷酸化（BAP或CIAP）处理，导致载体的自我连接（这种情况在单酶切下发生率很高！）。
赞一下(1人) 回复此楼
There is nothing either good or bad, thinking makes it so.
2楼2014-10-18 22:43:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yan342221

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by s_lich28 at 2014-10-18 22:43:43
首先说没加连接酶，能想到的可能是楼主在载体的纯化中没割胶回收，导致没有被切割的载体一起混在最后的连接混合物中。所以如果不幸言中的话请楼主割胶回收酶处理过的载体。
然后是加水也能连上，当然上述没被切割的 ...

那请问水的条带跟目标条带为什么一致？
赞一下 回复此楼
3楼2014-10-20 19:02:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

s_lich28

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yan342221 at 2014-10-20 20:02:49
那请问水的条带跟目标条带为什么一致？...

因为不知道楼主的实验体系，所以只能做猜测。如果楼主加水连接载体然后做菌落PCR出现目标条带大小一致的条带，那说明菌体里含有的不是空的载体，能作出的猜测就是载体被原来未切割的质粒污染了。
赞一下 回复此楼
There is nothing either good or bad, thinking makes it so.
4楼2014-10-20 23:24:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yan342221 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 TZqyNTBa07NP 2026-11-13 3/150 2026-11-15 14:22 by 0aDbZAghdVq9
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 TZqyNTBa07NP 2026-11-13 4/200 2026-11-15 14:11 by 0aDbZAghdVq9
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 TZqyNTBa07NP 2026-11-13 3/150 2026-11-15 11:25 by xSrQNSSjcgoX
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 TZqyNTBa07NP 2026-11-13 4/200 2026-11-15 10:08 by xSrQNSSjcgoX
[论文投稿] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 uKOSCocCb6Fm 2026-11-12 7/350 2026-11-15 03:10 by xSrQNSSjcgoX
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 uKOSCocCb6Fm 2026-11-12 8/400 2026-11-15 02:26 by xSrQNSSjcgoX
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 uKOSCocCb6Fm 2026-11-12 9/450 2026-11-15 02:04 by xSrQNSSjcgoX
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 6/300 2026-11-15 00:24 by Equinoxhua
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 YHiw1gou1Eda 2026-11-10 8/400 2026-11-14 22:51 by Equinoxhua
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 cdqGD6ftHmbl 2026-11-11 4/200 2026-11-12 12:26 by ECLTXnJnRSXf
[基金申请] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 7/350 2026-11-12 11:33 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 7/350 2026-11-12 11:31 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 5/250 2026-11-12 11:14 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 czAiolzR0IJC 2026-11-10 7/350 2026-11-12 11:09 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 5/250 2026-11-12 10:49 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +8 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 12/600 2026-11-12 09:32 by HajghKOMynmz
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 9/450 2026-11-12 09:21 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 6/300 2026-11-12 06:03 by 9fOTqj074tIg
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 7/350 2026-11-12 00:44 by 9fOTqj074tIg
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 6/300 2026-11-11 17:03 by TgvkbZZl9tqB
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭