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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助 3'RACE 牛人快来帮帮忙！！！
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yoyo单眼皮

铁虫 (小有名气)

[求助] 求助 3'RACE 牛人快来帮帮忙！！！ 已有2人参与

退火温度很高 获得条带比对 不知道为什么每次都是26S RNA 序列！！你们有过这样的情况吗？？
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1楼 2014-10-08 14:28:10
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王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 鼓励交流 2014-10-11 11:23:55
我现在正在做RACE，给你几点建议：
1、RACE在做PCR的时候采取touchdown程序，引物TM值尽量达到65度及以上；
2、采用巢式PCR拉取目的片段；
3、做巢式PCR的时候加阴性对照和阳性对照。
（注：确保RNA及反转录没有问题的前提下。）
按照上面几步做，绝对可以做出来。
赞一下(1人) 回复此楼
没有做不到，只有想不到！
2楼2014-10-10 19:27:16
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

我这么久不来。。。你还在纠结3‘RACE
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3楼2014-10-10 19:45:40
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yoyo单眼皮

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-10-10 19:45:40

我这么久不来。。。你还在纠结3‘RACE

哈哈哈哈哈，我就差一点点了 ，差400bp就有全长了。。。。但是还是有很多26S.
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4楼2014-10-14 09:19:40
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 王平阳 at 2014-10-10 19:27:16
我现在正在做RACE，给你几点建议：
1、RACE在做PCR的时候采取touchdown程序，引物TM值尽量达到65度及以上；
2、采用巢式PCR拉取目的片段；
3、做巢式PCR的时候加阴性对照和阳性对照。
（注：确保RNA及反转录没有 ...

引物Tm值都达到65以上，那TD最高温度不都70度以上了？会不会偏高呢？
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5楼2016-01-06 20:21:56
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