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yoyo单眼皮

铁虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 105.8
散金: 10
红花: 1
帖子: 103
在线: 37.2小时
虫号: 1663839
注册: 2012-03-04
专业: 生物大分子结构与功能

[求助] 求助 3'RACE 牛人快来帮帮忙！！！已有2人参与

退火温度很高获得条带比对不知道为什么每次都是26S RNA 序列！！你们有过这样的情况吗？？

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关于设计克隆引物时产物片段大小有限制吗，如果我没有全长要怎么做能克隆到它的全长已经有14人回复
懂图位克隆的请进已经有3人回复
请教各位高人，基因克隆表达的流程是什么？已经有8人回复
3'RACE做了几次，为什么老是这样子，大家看一下帮帮忙吧，苦闷死了！~ 已经有10人回复

1楼 2014-10-08 14:28:10

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

应助: 8 (幼儿园)
金币: 1571.1
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在线: 75.5小时
虫号: 3487227
注册: 2014-10-20
性别: GG
专业: 水产生物免疫学与病害控制

引用回帖:

2楼: Originally posted by 王平阳 at 2014-10-10 19:27:16
我现在正在做RACE，给你几点建议：
1、RACE在做PCR的时候采取touchdown程序，引物TM值尽量达到65度及以上；
2、采用巢式PCR拉取目的片段；
3、做巢式PCR的时候加阴性对照和阳性对照。
（注：确保RNA及反转录没有 ...

引物Tm值都达到65以上，那TD最高温度不都70度以上了？会不会偏高呢？