应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 求大神，蛋白质纯化过程如何解决降解和沉淀
51/1返回列表
查看: 1818  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

火舞精灵3

铜虫 (正式写手)

[求助] 求大神，蛋白质纯化过程如何解决降解和沉淀 已有4人参与

我在His亲和过程中总是出现蛋白降解，我该如何解决啊
还有一个蛋白，浓度稍高点就沉淀了，咪唑洗脱下来的就是沉淀悬浮状了，看着这蛋白真心疼啊
大家有没有什么好办法，指点一下小弟
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

资源

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
翻新核弹头,回收二手航母,大修核反应堆,航天飞机保养换三滤,高空作业擦洗卫星表面积尘,南极冰川修复,提供原子对撞机,提供捕捉反物质原子技术支持
1楼 2014-10-08 11:01:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

eagleeyess

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

关于降解，从三个方面考虑，一是温度，尽量低温；二是蛋白酶抑制剂，单一种类效果有限，最好混合用；三是时间，尽量缩短纯化时间。
关于目标蛋白沉淀的问题，可以从这几个方面考虑，一是缓冲体系；二是盐浓度；三，有些蛋白疏水性强，需要加入表面活性剂帮助溶解。还有一些需要特异性的辅助因子来稳定它，比如金属离子，多糖等因素。
希望对你有帮助！
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2014-10-11 13:49:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

guaihaizi

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.可以试试加入PMSF，最好是在低温的层析冷柜里操作就更好了，或是开空调控制在22度左右也可以
2.蛋白沉淀与蛋白的性质相关：（因素有很多的）
（1）咪唑所在的缓冲体系的PH太过接近你目的蛋白的等电点PI，比如将PH=7.4的PB缓冲体系换成PH=8.5的Tris-HCl缓冲体系；
（2）蛋白本身含过多半胱氨酸区域等致使蛋白表达过程中折叠不正确；
（3）蛋白疏水区域过多，可以加入10-50%甘油；
（4）缓冲体系中的NaCl的浓度也相关，可适当降低或提高浓度。
赞一下 回复此楼
2楼2014-10-08 11:23:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

火舞精灵3

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by guaihaizi at 2014-10-08 11:23:52
1.可以试试加入PMSF，最好是在低温的层析冷柜里操作就更好了，或是开空调控制在22度左右也可以
2.蛋白沉淀与蛋白的性质相关：（因素有很多的）
（1）咪唑所在的缓冲体系的PH太过接近你目的蛋白的等电点PI，比如将 ...

我用着PMSF，Nacl用的500mM，

你说 的第一条咪唑的问题，我没看懂，那不是应该接近等电点的吗，为什么要远离？

我用的pH8.0Tris-HCl
赞一下 回复此楼
翻新核弹头,回收二手航母,大修核反应堆,航天飞机保养换三滤,高空作业擦洗卫星表面积尘,南极冰川修复,提供原子对撞机,提供捕捉反物质原子技术支持
3楼2014-10-08 12:18:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
咪唑配制的要远离等电点0.5pH以上，否则会造成蛋白絮凝的。因为蛋白在pI时候曝露很多疏水基团，造成絮凝。
赞一下 回复此楼
4楼2014-10-08 14:25:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856调剂，是学校就去 +6 sllhht 2026-03-19 7/350 2026-03-19 19:50 by 制度的
[考研] 【考研调剂】化学专业 281分，一志愿四川大学，诚心求调剂 +5 吃吃吃才有意义 2026-03-19 5/250 2026-03-19 16:18 by 30660438
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +10 慕寒mio 2026-03-16 10/500 2026-03-19 15:26 by 丁丁*
[考研] 化学求调剂 +3 临泽境llllll 2026-03-17 4/200 2026-03-19 13:59 by houyaoxu
[考研] 085600材料与化工求调剂 +6 绪幸与子 2026-03-17 6/300 2026-03-19 13:27 by houyaoxu
[考研] 一志愿南昌大学，327分，材料与化工085600 +3 Ncdx123456 2026-03-19 3/150 2026-03-19 13:18 by houyaoxu
[考研] 346求调剂[0856] +3 WayneLim327 2026-03-16 6/300 2026-03-19 11:21 by WayneLim327
[考研] 332求调剂 +3 ydfyh 2026-03-17 3/150 2026-03-19 10:14 by 功夫疯狂
[考研] 311求调剂 +4 冬十三 2026-03-18 4/200 2026-03-18 21:47 by 尽舜尧1
[考研] 311求调剂 +6 26研0 2026-03-15 6/300 2026-03-18 14:43 by haxia
[考研] 一志愿西南交大，求调剂 +4 材化逐梦人 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:22 by 007_lilei
[考研] 304求调剂 +12 小熊joy 2026-03-14 13/650 2026-03-18 12:34 by Linda Hu
[考研] 0854，计算机类招收调剂 +3 胡辣汤放糖 2026-03-15 6/300 2026-03-18 12:09 by 上岸上岸……..
[考研] 265求调剂 +3 梁梁校校 2026-03-17 3/150 2026-03-18 09:12 by zhukairuo
[考研] 278求调剂 +5 烟火先于春 2026-03-17 5/250 2026-03-18 08:43 by 星空星月
[考研] 268求调剂 +8 一定有学上- 2026-03-14 9/450 2026-03-17 17:47 by laoshidan
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:12 by ruiyingmiao
[考研] 一志愿南京大学，080500材料科学与工程，调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
[考研] 321求调剂 +5 大米饭！ 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:33 by houyaoxu
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:43 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭