应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 求大神，蛋白质纯化过程如何解决降解和沉淀
51/1返回列表
查看: 1803  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

火舞精灵3

铜虫 (正式写手)

[求助] 求大神，蛋白质纯化过程如何解决降解和沉淀 已有4人参与

我在His亲和过程中总是出现蛋白降解，我该如何解决啊
还有一个蛋白，浓度稍高点就沉淀了，咪唑洗脱下来的就是沉淀悬浮状了，看着这蛋白真心疼啊
大家有没有什么好办法，指点一下小弟
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

资源

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
翻新核弹头,回收二手航母,大修核反应堆,航天飞机保养换三滤,高空作业擦洗卫星表面积尘,南极冰川修复,提供原子对撞机,提供捕捉反物质原子技术支持
1楼 2014-10-08 11:01:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

eagleeyess

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

关于降解，从三个方面考虑，一是温度，尽量低温；二是蛋白酶抑制剂，单一种类效果有限，最好混合用；三是时间，尽量缩短纯化时间。
关于目标蛋白沉淀的问题，可以从这几个方面考虑，一是缓冲体系；二是盐浓度；三，有些蛋白疏水性强，需要加入表面活性剂帮助溶解。还有一些需要特异性的辅助因子来稳定它，比如金属离子，多糖等因素。
希望对你有帮助！
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2014-10-11 13:49:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

guaihaizi

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.可以试试加入PMSF，最好是在低温的层析冷柜里操作就更好了，或是开空调控制在22度左右也可以
2.蛋白沉淀与蛋白的性质相关：（因素有很多的）
（1）咪唑所在的缓冲体系的PH太过接近你目的蛋白的等电点PI，比如将PH=7.4的PB缓冲体系换成PH=8.5的Tris-HCl缓冲体系；
（2）蛋白本身含过多半胱氨酸区域等致使蛋白表达过程中折叠不正确；
（3）蛋白疏水区域过多，可以加入10-50%甘油；
（4）缓冲体系中的NaCl的浓度也相关，可适当降低或提高浓度。
赞一下 回复此楼
2楼2014-10-08 11:23:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

火舞精灵3

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by guaihaizi at 2014-10-08 11:23:52
1.可以试试加入PMSF，最好是在低温的层析冷柜里操作就更好了，或是开空调控制在22度左右也可以
2.蛋白沉淀与蛋白的性质相关：（因素有很多的）
（1）咪唑所在的缓冲体系的PH太过接近你目的蛋白的等电点PI，比如将 ...

我用着PMSF，Nacl用的500mM，

你说 的第一条咪唑的问题，我没看懂，那不是应该接近等电点的吗，为什么要远离？

我用的pH8.0Tris-HCl
赞一下 回复此楼
翻新核弹头,回收二手航母,大修核反应堆,航天飞机保养换三滤,高空作业擦洗卫星表面积尘,南极冰川修复,提供原子对撞机,提供捕捉反物质原子技术支持
3楼2014-10-08 12:18:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
咪唑配制的要远离等电点0.5pH以上，否则会造成蛋白絮凝的。因为蛋白在pI时候曝露很多疏水基团，造成絮凝。
赞一下 回复此楼
4楼2014-10-08 14:25:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭