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syn1985木虫 (正式写手)
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[求助]
要表达的蛋白 基因序列扩出两个长度的正确片段 给跪了 求问各位大神 已有2人参与
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小虫是做丝状真菌基因表达的，前一段时间做了个基因，用一对引物从mRNA中扩增出来了两个片段A和B，就全部连接到T载体上送去测序，本想着有一个肯定是错配，结果测序结果发现A和B都是目的片段，引物都可以比对上，只是A比B少剪切了一段序列，长度在200bp（在5‘端），我将这两段序列用软件翻译了一下，编码框不一样：A是+3 B是+1，两个编码的蛋白只在N端有20个AA不一样，其他都一样，用NCBI找了保守区也是相同的。 我现在不知道应该尝试表达哪一段序列，这两段不太一样的序列有说明了什么 |
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liuderong
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4楼2014-10-04 15:49:56
【答案】应助回帖
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| 我做植物基因克隆也碰过类似情况，可能原因是 一个基因簇或者基因家族里的两个基因在DNA序列上串联排列，并且高度同源，所以你用一对引物，有概率把两个都克隆出来了，这种情况就是一个基因家族的两个成员。要么就是生物中基因复制现象，就是一个基因在基因组中发生复制扩张，那么两个就是一个基因。还有情况就是错配了。 你可以提高温度看看结果如何，然后把其他真菌中克隆的类似基因与之对比，看看通过保守结构域分析 能不能区别两者差异 |
2楼2014-10-04 15:10:19
syn1985
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3楼2014-10-04 15:14:35
syn1985
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5楼2014-10-04 16:29:33
10