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茜草科

新虫 (小有名气)

[求助] 怎么分析尿样 已有2人参与

课题是肝毒性的研究,动物预试已经结束,现在准备做分析,遇到很多困难,希望大家多多指教!!!
      首先所测成分含量较低,怎么富集尿样呢,
      有文献是用固相小柱,有的浓缩,有的又说尿样不能浓缩会损伤柱子,得稀释。
      另外用甲醇处理尿样是除盐吗?有的用甲酸水稀释。目的是什么呢?
   
      检测是不是必须得用质谱才行?液相的响应有点低。
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liuzhaomin

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以用固相萃取富集,也可以用液液萃取浓缩富集,甲醇的作用是沉淀尿液中的蛋白。
如果用固相萃取和液液萃取就不需要再沉淀蛋白了。
2楼2014-09-25 09:22:28
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茜草科

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by liuzhaomin at 2014-09-25 09:22:28
可以用固相萃取富集,也可以用液液萃取浓缩富集,甲醇的作用是沉淀尿液中的蛋白。
如果用固相萃取和液液萃取就不需要再沉淀蛋白了。

谢谢你 尿里面蛋白很少吧? 我还在想是不是除盐

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-09-25 12:07:09
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liuzhaomin

金虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 茜草科 at 2014-09-25 12:07:09
谢谢你 尿里面蛋白很少吧? 我还在想是不是除盐
...

蛋白不少,你用乙腈沉淀离心一下就能看到
4楼2014-09-25 14:22:48
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破土草儿

木虫 (正式写手)

如果测量的成分多,结构差异大,用液液萃取不合适。用1ml固相萃取柱把!前提每个时间点的尿液量有500,600微升尿液。上柱子前,用一倍或者两倍的水稀释一下!帖子中提到的甲醇稀释,大部分还是为了除盐。
5楼2014-09-25 14:42:54
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茜草科

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by liuzhaomin at 2014-09-25 14:22:48
蛋白不少,你用乙腈沉淀离心一下就能看到...

好的 谢谢!
6楼2014-09-25 19:37:13
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茜草科

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 破土草儿 at 2014-09-25 14:42:54
如果测量的成分多,结构差异大,用液液萃取不合适。用1ml固相萃取柱把!前提每个时间点的尿液量有500,600微升尿液。上柱子前,用一倍或者两倍的水稀释一下!帖子中提到的甲醇稀释,大部分还是为了除盐。

好的!谢谢师兄啦
7楼2014-09-25 19:40:21
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foot_print

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
茜草科: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-09-27 10:38:09
1. 测定成分虽然含量低,但是LC-MS的灵敏度一般是够的;
2. 肝毒性研究建议做相应的生化药理指标,连同肾一起做;
3.如果测定的化合物极性不是太大,可以考虑液液萃取,用乙酸乙酯正丁醇等萃取都是可行的方法,萃取后用适当的溶剂复溶,固相萃取小柱一般都是成本比较高;
4. 萃取时候因尿样中基质复杂,可加入适当的缓冲盐或易挥发的酸碱处理
5. 如果要测的化合物找不到,可以考虑测定其代谢产物;
6. 尿样收集容易受到污染等因素的影响,请务必注意;
7. 尿样一般不能直接进样,其中具体成分自己查
whereyouwanttogo!
8楼2014-09-26 15:28:06
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