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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 如何将两段同样的序列进行无缝的串联重复连接？
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jesse86

金虫 (小有名气)

[求助] 如何将两段同样的序列进行无缝的串联重复连接？已有6人参与

RT，该片段本身有110bp左右。
重叠PCR吗？重叠区域要多长呢？有什么要注意的吗？还有其他快捷的方法吗？
谢谢先！
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没什么好写的
1楼2014-09-24 09:20:20
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

陈日飞

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-10-05 22:40:05
jesse86: 金币+2 2014-10-06 11:39:56
可以试试BbsI酶，可以做到无缝连接。随便百度就知道BbsI是怎么作用的。不过，这样你得先合成带有BsbI酶切位点的引物。加上BbsI酶本身就比较贵，这样做可能比全合成都贵，所以我建议你还是直接全合成省事···我以我自己血淋淋的教训告诉你。
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6楼2014-10-05 18:06:29
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zergbloody

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

合成吧 我也自己做过 虽然成功了 但是你算一下你投入的各种酶 提质粒的成本 培养基的成本 以及最关键的时间的成本 还是合成是最便宜的 因为实验难免会反复 这样成本就高了 老板其实最关心的还是结果 劝楼主不要难为自己 真想自己做可以联系我 我前一段时间连接了4个重复

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8楼2014-10-07 08:23:52
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lulushuo

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by zergbloody at 2014-10-07 08:23:52
合成吧 我也自己做过 虽然成功了 但是你算一下你投入的各种酶 提质粒的成本 培养基的成本 以及最关键的时间的成本 还是合成是最便宜的 因为实验难免会反复 这样成本就高了 老板其实最关心的还是结果 劝楼主不要难为 ...

请问是如何连接4个重复的？请指教！谢谢~~
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10楼2015-12-29 15:25:46
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普通回帖

liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
jesse86: 金币+1 2014-09-26 13:10:15
我觉得110的片段要串联的话，最快、最好的方法就是直接叫公司合成，还可以一次串联好几个片段！
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2楼2014-09-26 12:17:33
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jesse86

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liuderong at 2014-09-26 12:17:33
我觉得110的片段要串联的话，最快、最好的方法就是直接叫公司合成，还可以一次串联好几个片段！

谢谢 ，我打算先扩一下，实在扩不出来再合成吧，毕竟合成有点小贵
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没什么好写的
3楼2014-09-26 13:06:57
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aoaoshch

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jesse86(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-26 19:31:30
jesse86: 金币+1, 谢谢 2014-10-06 11:40:06
overlap pcr，重叠部分一般25bp左右。由于片段较短，可以在载体两端各加一部分一起扩增。
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4楼2014-09-26 14:32:58
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jian212

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-30 21:54:20
用PCR的方法不好做，我们都是添加酶切位点之后酶切串联的
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学习再学习，努力再努力。
5楼2014-09-29 15:59:39
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jesse86

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 陈日飞 at 2014-10-05 18:06:29
可以试试BbsI酶，可以做到无缝连接。随便百度就知道BbsI是怎么作用的。不过，这样你得先合成带有BsbI酶切位点的引物。加上BbsI酶本身就比较贵，这样做可能比全合成都贵，所以我建议你还是直接全合成省事···我以我 ...

查了下价格，确实很贵~ 不过还是学到新东西了 谢谢
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没什么好写的
7楼2014-10-06 11:39:28
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

在连四个重复，连上两次后一直坎坎坷坷，后来直接把四次重复合成的

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天道酬勤
9楼2014-10-07 10:20:11
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