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jesse86

金虫 (小有名气)

[求助] 如何将两段同样的序列进行无缝的串联重复连接? 已有6人参与

RT,该片段本身有110bp左右。
重叠PCR吗?重叠区域要多长呢?有什么要注意的吗?还有其他快捷的方法吗?
谢谢先!
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没什么好写的
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jesse86

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 陈日飞 at 2014-10-05 18:06:29
可以试试BbsI酶,可以做到无缝连接。随便百度就知道BbsI是怎么作用的。不过,这样你得先合成带有BsbI酶切位点的引物。加上BbsI酶本身就比较贵,这样做可能比全合成都贵,所以我建议你还是直接全合成省事···我以我 ...

查了下价格,确实很贵~ 不过还是学到新东西了 谢谢
没什么好写的
7楼2014-10-06 11:39:28
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查看全部 11 个回答

liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
jesse86: 金币+1 2014-09-26 13:10:15
我觉得110的片段要串联的话,最快、最好的方法就是直接叫公司合成,还可以一次串联好几个片段!
2楼2014-09-26 12:17:33
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jesse86

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by liuderong at 2014-09-26 12:17:33
我觉得110的片段要串联的话,最快、最好的方法就是直接叫公司合成,还可以一次串联好几个片段!

谢谢 ,我打算先扩一下,实在扩不出来再合成吧,毕竟合成有点小贵
没什么好写的
3楼2014-09-26 13:06:57
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aoaoshch

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
jesse86(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-26 19:31:30
jesse86: 金币+1, 谢谢 2014-10-06 11:40:06
overlap pcr,重叠部分一般25bp左右。由于片段较短,可以在载体两端各加一部分一起扩增。
4楼2014-09-26 14:32:58
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