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singlestarss银虫 (正式写手)
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[求助]
从ET12567/PUZ8002提取质粒电转化JTU007菌
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求助：之前第一次在卡那抗性（45ug/ml）中对ET12567/PUZ8002菌摇床提取质粒，取3微升电转化JTU007菌后，同时以无质粒的JTU007感受态为对照组都活化后，涂布卡那抗性（45ug/ml）平板，第二天发现对照组和实验组都出现了很多菌落。然后从ET12567/PUZ8002、原始JTU007菌和转化平板上随意挑取的菌落于Kana抗性中摇床后提质粒/酶切后发现,质粒条带都很淡，只有从ET菌中提取的质粒有微弱的酶切条带，而且所有的都有拖尾老师说是背景基因组DNA造成的。一开始怀疑是Kana抗生素的问题，但是换过抗生素后，对照组对应平板还是出现很多菌落。 看资料说是在养ET菌时，还要再加抗生素，然后我就第三次地在氯霉素和Kana抗性环境养菌提取质粒，浓度依然很低，而且再次电转化涂布Chl+Kana抗性(24/45ug/ml)板后过夜培养，对照板依旧出现很多菌落。我都不知道怎么办，老师说是ET菌中PUZ8002质粒有四环素抗性，建议用四环素，我怕用过之后，依然失望，有没有大侠给与指点，不剩感激，下面附上质粒及酶切图 |
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singlestarss
银虫 (正式写手)
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2楼2014-11-14 21:41:05
简简单单的的
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 61.3
- 散金: 30
- 帖子: 53
- 在线: 5.6小时
- 虫号: 6590475
- 注册: 2017-05-23
- 性别: MM
- 专业: 微生物遗传育种学
3楼2018-09-21 18:10:31
40