| 查看: 14738 | 回复: 7 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
请教几个和Protein Thermal Shift( ThermoFluor)有关的问题，有对RT-PCR了解的也可以 已有2人参与
|
|||
|
背景简介（做过的可以略过）： Protein Thermal Shift（ ThermoFluor），就是测蛋白质热转变稳定性的一种技术，属于RT-PCR技术的一种衍生用法。可以高通量的对蛋白进行筛选，蛋白与配体的相互作用等。具体信息可以参见wiki百科。http://en.wikipedia.org/wiki/Thermal_Shift_Assay A thermal shift assay, also called Differential Scanning Fluorimetry (DSF) is a thermal-denaturation assay that measures the thermal stability of a target protein and a subsequent increase in protein melting temperature upon binding of a ligand to the protein. Life公司也推出了相关的产品： http://www.lifetechnologies.com/ ... -thermal-shift.html 具体原理可以简单的理解为，蛋白有疏水区结构，隐藏在内部，在温度上升时，蛋白的结构会被打开，暴露出疏水区，荧光染料Sypro Orange就可以与该区域进行结合，并被激发荧光。在有配体（小分子）结合的情况下，蛋白稳定性会上升，表现为熔解温度的上升（>4℃）。 实验过程： 本实验中使用的是Bio-rad 公司的RT-PCR仪，利用CFX Manager（Data Analysis）生成的数据如图所示：  左图为蛋白熔解曲线，右图为对温度求导曲线（负值）。 在实验中设置了对照组，即图中红色线，加入配体（小分子）后的实验曲线为绿色线。 问题1，为何实验组的熔解曲线峰值偏低？ 问题2，从该熔解曲线看，是否可以认为蛋白与小分子有相互作用？ 问题3（略业余），Bio-rad公司给出的分析程序为何要将导数曲线取负值？ 问题4，在类似的有荧光的反应中，如果反应体系中出现沉淀，是否会造成荧光值的剧烈变化？（数量级的变化） |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有232人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 有关RT-PCR模板RNA量的问题，请高手解答！！！
已经有16人回复
|
本帖内容被屏蔽 |
8楼2022-02-08 17:23:44
2楼2017-08-21 12:01:02
3楼2019-11-22 18:29:24
4楼2020-12-07 15:19:15
100