应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 请教几个和Protein Thermal Shift( ThermoFluor)有关的问题，有对RT-PCR了解的也可以
81/1返回列表
查看: 14431  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

aini_1314

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教几个和Protein Thermal Shift( ThermoFluor)有关的问题，有对RT-PCR了解的也可以 已有2人参与

背景简介（做过的可以略过）：
Protein Thermal Shift（ ThermoFluor），就是测蛋白质热转变稳定性的一种技术，属于RT-PCR技术的一种衍生用法。可以高通量的对蛋白进行筛选，蛋白与配体的相互作用等。具体信息可以参见wiki百科。http://en.wikipedia.org/wiki/Thermal_Shift_Assay
A thermal shift assay, also called Differential Scanning Fluorimetry (DSF) is a thermal-denaturation assay that measures the thermal stability of a target protein and a subsequent increase in protein melting temperature upon binding of a ligand to the protein.
Life公司也推出了相关的产品：
http://www.lifetechnologies.com/ ... -thermal-shift.html
具体原理可以简单的理解为，蛋白有疏水区结构，隐藏在内部，在温度上升时，蛋白的结构会被打开，暴露出疏水区，荧光染料Sypro Orange就可以与该区域进行结合，并被激发荧光。在有配体（小分子）结合的情况下，蛋白稳定性会上升，表现为熔解温度的上升（>4℃）。
实验过程：
本实验中使用的是Bio-rad 公司的RT-PCR仪，利用CFX Manager（Data Analysis）生成的数据如图所示：
请教几个和Protein Thermal Shift( ThermoFluor)有关的问题，有对RT-PCR了解的也可以
左图为蛋白熔解曲线，右图为对温度求导曲线（负值）。
在实验中设置了对照组，即图中红色线，加入配体（小分子）后的实验曲线为绿色线。
问题1，为何实验组的熔解曲线峰值偏低？
问题2，从该熔解曲线看，是否可以认为蛋白与小分子有相互作用？
问题3（略业余），Bio-rad公司给出的分析程序为何要将导数曲线取负值？
问题4，在类似的有荧光的反应中，如果反应体系中出现沉淀，是否会造成荧光值的剧烈变化？（数量级的变化）
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-09-03 20:58:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

普鲁旺斯花季

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主，你好，我最近也在做这个实验。用的是BioSystems的PCR仪，做出的结果问题很大，主要是不知道选择哪一种reporter ，之前做的时候选的是ROX，其他还有 SYBR green，FAM等。想问你是具体怎么做的
赞一下 回复此楼
一生转而得一夏，当司掌好年华
2楼2017-08-21 12:01:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ltxg123

新虫 (初入文坛)
你好，新手，想请教一下，做蛋白热漂移实验拿到数据之后应该怎么进行分析呢？
赞一下 回复此楼
3楼2019-11-22 18:29:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈陈陈梦

新虫 (初入文坛)
我也是新手，联系方式微信：mm05090509，希望有人一起交流

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2020-12-07 15:19:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈陈陈梦

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ltxg123 at 2019-11-22 18:29:24
你好，新手，想请教一下，做蛋白热漂移实验拿到数据之后应该怎么进行分析呢？

你好，你会分析了吗

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2020-12-07 15:19:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈陈陈梦

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ltxg123 at 2019-11-22 18:29:24
你好，新手，想请教一下，做蛋白热漂移实验拿到数据之后应该怎么进行分析呢？

你好，你会分析了吗

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2020-12-07 15:19:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈陈陈梦

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by ltxg123 at 2019-11-22 18:29:24
你好，新手，想请教一下，做蛋白热漂移实验拿到数据之后应该怎么进行分析呢？

你好，你会分析了吗

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2020-12-07 15:20:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinvijie

禁虫
本帖内容被屏蔽
8楼2022-02-08 17:23:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 aini_1314 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 考研化学308分求调剂 +3 你好明天你好 2026-03-23 4/200 2026-03-23 10:30 by 你好明天你好
[考研] 070300化学求调剂 +5 苑豆豆 2026-03-20 5/250 2026-03-23 09:39 by guoliang1816
[考研] 招08考数学 +4 laoshidan 2026-03-20 11/550 2026-03-23 08:47 by laoshidan
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:12 by 朱芷琳
[考研] 一志愿华中科技大学071000，求调剂 +4 沿岸有贝壳6 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:21 by ilovexiaobin
[考研] 材料与化工（0856）304求 B区 调剂 +3 邱gl 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:47 by lature00
[考研] 279分求调剂 一志愿211 +14 chaojifeixia 2026-03-19 15/750 2026-03-21 13:24 by zhukairuo
[考研] 南昌大学材料专硕311分求调剂 +6 77chaselx 2026-03-20 6/300 2026-03-21 07:24 by JourneyLucky
[考研] 301求调剂 +10 yy要上岸呀 2026-03-17 10/500 2026-03-21 03:14 by JourneyLucky
[考研] 化学求调剂 +4 临泽境llllll 2026-03-17 5/250 2026-03-21 02:23 by JourneyLucky
[考研] 288求调剂 +16 于海海海海 2026-03-19 16/800 2026-03-20 22:28 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +7 ^O^乜 2026-03-19 7/350 2026-03-20 21:43 by JourneyLucky
[考研] 353求调剂 +3 拉钩不许变 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:56 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工专硕调剂 +7 heming3743 2026-03-16 7/350 2026-03-20 19:31 by zhukairuo
[考研] 0856调剂，是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
[论文投稿] 申请回稿延期一个月，编辑同意了。但系统上的时间没变，给编辑又写邮件了，没回复 10+3 wangf9518 2026-03-17 4/200 2026-03-19 23:55 by babero
[考研] 生物学调剂招人！！！ +3 山海天岚 2026-03-17 4/200 2026-03-19 21:34 by 怎么释怀
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
[考研] 11408 一志愿西电，277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭