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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » 间接ELISA测定抗体效价
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sunlinaok

新虫 (初入文坛)

[求助] 间接ELISA测定抗体效价 已有2人参与

我准备做间接ELISA测定多抗效价，自己做原核表达的猪的一个蛋白，纯化复性后打兔子做多抗，现在想检测多抗效价，周围没有人做这个。所以什么都不知道。蠢蠢的问一下，1.空白组是什么，阴性对照组和阳性对照组都是什么？2.抗原包被是用自己做的蛋白包被，还是购买商品化的蛋白包被？
自己真的不懂，看了很多资料都是操作方法，但是自己卡在实验组如何设计。也就是不知道要设计多少个孔，每个孔加什么？空白组是不包被不加任何抗体，只是操作中也清洗么？或者空白组只是包被，后续不加抗体？阴性对照组是只包被，不加抗体，还是不包被只加抗体？加抗体的阴性对照组用不用设置稀释梯度？目前对于酶标空如何设计处于混沌状态，希望各位高手帮忙！感激不尽！如果方便，能帮忙画图说明么？
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1楼 2014-08-30 15:42:54
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feiyue122

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

空白对照是指实验过程中，不加血清抗体和酶标二抗的，只加稀释液的；阴性对照是指实验过程中，加没有免疫过的兔子的血清，阳性对照，就是免疫过兔子的血清。另外如果你自己纯化的重组蛋白不纯的话，购买商品化的蛋白好了，这样的话，你就要用商品化的蛋白去免疫了。
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3楼2015-01-27 12:34:32
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花开满城香

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
商品化蛋白和自己蛋白两者都做，可以做个对照。如果只做一者，选商品化蛋白。空白是包被缓冲液，其他操作相同。阴性是包被少量蛋白，这里的蛋白就是抗原了，其他操作相同，阴性抗原浓度请查阅相关文献。阳性是包被大量抗原，浓度请自查阅。空白，阴性，阳性只是包被的东西或浓度有差异，其他操作均应相同，希望能帮到你

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知之为知之，不知为不知
2楼2014-08-31 01:04:34
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