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sunlinaok

新虫 (初入文坛)

[求助] 间接ELISA测定抗体效价 已有2人参与

我准备做间接ELISA测定多抗效价,自己做原核表达的猪的一个蛋白,纯化复性后打兔子做多抗,现在想检测多抗效价,周围没有人做这个。所以什么都不知道。蠢蠢的问一下,1.空白组是什么,阴性对照组和阳性对照组都是什么?2.抗原包被是用自己做的蛋白包被,还是购买商品化的蛋白包被?
自己真的不懂,看了很多资料都是操作方法,但是自己卡在实验组如何设计。也就是不知道要设计多少个孔,每个孔加什么?空白组是不包被不加任何抗体,只是操作中也清洗么?或者空白组只是包被,后续不加抗体?阴性对照组是只包被,不加抗体,还是不包被只加抗体?加抗体的阴性对照组用不用设置稀释梯度?目前对于酶标空如何设计处于混沌状态,希望各位高手帮忙!感激不尽!如果方便,能帮忙画图说明么?
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花开满城香

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
商品化蛋白和自己蛋白两者都做,可以做个对照。如果只做一者,选商品化蛋白。空白是包被缓冲液,其他操作相同。阴性是包被少量蛋白,这里的蛋白就是抗原了,其他操作相同,阴性抗原浓度请查阅相关文献。阳性是包被大量抗原,浓度请自查阅。空白,阴性,阳性只是包被的东西或浓度有差异,其他操作均应相同,希望能帮到你

[ 发自小木虫客户端 ]
知之为知之,不知为不知
2楼2014-08-31 01:04:34
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feiyue122

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

空白对照是指实验过程中,不加血清抗体和酶标二抗的,只加稀释液的;阴性对照是指实验过程中,加没有免疫过的兔子的血清,阳性对照,就是免疫过兔子的血清。另外如果你自己纯化的重组蛋白不纯的话,购买商品化的蛋白好了,这样的话,你就要用商品化的蛋白去免疫了。
3楼2015-01-27 12:34:32
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