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guoguo306

新虫 (初入文坛)

[求助] 一天之内,同一样品进样5针,针针不同,崩溃。求大神解答献计 已有8人参与

总的来说,就是保留时间逐渐提前,峰宽逐渐变大,见图。 大体的液相条件说一下,柱子是agilent SB-C18柱(色谱柱刚启用不久),流动相是乙腈和0.37%KH2PO4溶液(没有调PH),流速是1.5ml/ml, 用的是梯度洗脱,初始比例是6.5%乙腈。我怀疑是柱效降低造成的,不知道有没有同样遭遇的人,或是哪位大神能够指点迷津。


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daisyzhangwei

木虫 (职业作家)

不曾来过……

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
guoguo306: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-08-30 10:12:21
首先要排除一下你的色谱方法是不是可靠的
如果是可靠的,排除一下样品是不是不稳定,或者系统会不会是混合或者流速出现问题了,可以换一台仪器重新配样品试试
另外,会不会是每针之间的平衡不够。
如果排除掉这些问题,再考虑色谱柱的问题,从你给的图上看,柱子出问题的可能性不是太大
人生若只如初见...
2楼2014-08-28 09:26:31
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jixfeng

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
guoguo306: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2014-08-30 10:10:46
guoguo306: 金币+7, ★★★★★最佳答案 2014-08-30 10:12:36
以前用的一直正常? 那是的柱子不是Agilent SB 的吧?
同意是你的色谱柱效降低所致。6.5%的乙腈,酸性体系SB 柱子耐受根本不行。
曾经走一个拉氧头孢钠 乙酸胺体系(pH 差不多也在4左),5%乙腈梯度体系,也是没几针就这样。

有机相多冲冲,10%-50%-90%-50%-10%-样品流动相,估计就前几针会是正态的峰形。

色谱体系不当,建议换一个其他品牌的C18柱
不要寻找借口
14楼2014-08-28 14:29:37
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xppcomeon

捐助贵宾 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by xppcomeon at 2014-08-28 09:32:01
看到图了,先问一句流动相混匀了没,第二进样真有气泡没

我有一次是实验员配好流动相忘记摇匀出现了这种情况

[ 发自小木虫客户端 ]
6楼2014-08-28 09:39:31
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普通回帖

xppcomeon

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
怀疑系统有问题,楼主说说有哪些不同

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-08-28 09:29:53
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xppcomeon

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

看到图了,先问一句流动相混匀了没,第二进样真有气泡没

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-08-28 09:32:01
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xubang123

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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guoguo306: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-08-30 10:11:54
造成这种原因很多,
1)你多进几针,比如10针,看是否是系统没有平衡好
2)梯度没有走完没有平衡回去,也就是说,你紧跟着的下一针的起始流动相比例是6.5%乙腈,
你先试一试这两种解决方案,如果不行,尝试把A、B相PH调一致,或等度走样。
5楼2014-08-28 09:32:46
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guoguo306

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by daisyzhangwei at 2014-08-28 09:26:31
首先要排除一下你的色谱方法是不是可靠的
如果是可靠的,排除一下样品是不是不稳定,或者系统会不会是混合或者流速出现问题了,可以换一台仪器重新配样品试试
另外,会不会是每针之间的平衡不够。
如果排除掉这些 ...

色谱方法是一直使用的,样品也是稳定的。虽然每针的平衡不一定够,但不同时间进的针是存在保留时间逐渐提前,峰宽逐渐变大这种趋势的。如果是流速出现问题,流速变大,出峰时间提前,但峰宽不至于变大吧。流速变小会出现出峰时间延后。至于混合出问题,我没有仔细研究过,但理论上讲,有机相比例上升,会将出峰时间提前,但峰宽变成这样,实在令人匪夷所思。谢谢你的帮助!
7楼2014-08-28 09:50:45
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daisyzhangwei

木虫 (职业作家)

不曾来过……

引用回帖:
7楼: Originally posted by guoguo306 at 2014-08-28 09:50:45
色谱方法是一直使用的,样品也是稳定的。虽然每针的平衡不一定够,但不同时间进的针是存在保留时间逐渐提前,峰宽逐渐变大这种趋势的。如果是流速出现问题,流速变大,出峰时间提前,但峰宽不至于变大吧。流速变小 ...

你所说的只是在等度条件下符合,梯度条件更为复杂,流速混合出问题的话,完全有可能会碰到这种情况
人生若只如初见...
8楼2014-08-28 09:53:47
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guoguo306

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by xubang123 at 2014-08-28 09:32:46
造成这种原因很多,
1)你多进几针,比如10针,看是否是系统没有平衡好
2)梯度没有走完没有平衡回去,也就是说,你紧跟着的下一针的起始流动相比例是6.5%乙腈,
你先试一试这两种解决方案,如果不行,尝试把A、 ...

1)5针已经呈现这种趋势,我想足以表明这是个问题了
2)可能某针存在没有平衡好的问题,但至少有几针是相似的,而不是呈现一种趋势。
3)方法本身是药典方法,是不用调PH值的,而且采用等度洗脱不太现实

谢谢你的帮助
9楼2014-08-28 09:55:57
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guoguo306

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by xppcomeon at 2014-08-28 09:32:01
看到图了,先问一句流动相混匀了没,第二进样真有气泡没

流动相分A、B泵采用梯度洗脱,不排除是混样器出问题了。进样应该是没气泡的,即使哪针混入了,也不该一直呈现这种趋势啊
10楼2014-08-28 09:59:16
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