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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 一天之内，同一样品进样5针，针针不同，崩溃。求大神解答献计
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guoguo306

新虫 (初入文坛)

[求助] 一天之内，同一样品进样5针，针针不同，崩溃。求大神解答献计 已有8人参与

总的来说，就是保留时间逐渐提前，峰宽逐渐变大，见图。 大体的液相条件说一下，柱子是agilent SB-C18柱（色谱柱刚启用不久），流动相是乙腈和0.37%KH2PO4溶液（没有调PH），流速是1.5ml/ml, 用的是梯度洗脱，初始比例是6.5%乙腈。我怀疑是柱效降低造成的，不知道有没有同样遭遇的人，或是哪位大神能够指点迷津。
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1楼 2014-08-28 09:00:13
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guoguo306

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by daisyzhangwei at 2014-08-28 09:26:31
首先要排除一下你的色谱方法是不是可靠的
如果是可靠的，排除一下样品是不是不稳定，或者系统会不会是混合或者流速出现问题了，可以换一台仪器重新配样品试试
另外，会不会是每针之间的平衡不够。
如果排除掉这些 ...

色谱方法是一直使用的，样品也是稳定的。虽然每针的平衡不一定够，但不同时间进的针是存在保留时间逐渐提前，峰宽逐渐变大这种趋势的。如果是流速出现问题，流速变大，出峰时间提前，但峰宽不至于变大吧。流速变小会出现出峰时间延后。至于混合出问题，我没有仔细研究过，但理论上讲，有机相比例上升，会将出峰时间提前，但峰宽变成这样，实在令人匪夷所思。谢谢你的帮助！
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7楼2014-08-28 09:50:45
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guoguo306

新虫 (初入文坛)
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5楼: Originally posted by xubang123 at 2014-08-28 09:32:46
造成这种原因很多，
1）你多进几针，比如10针，看是否是系统没有平衡好
2）梯度没有走完没有平衡回去，也就是说，你紧跟着的下一针的起始流动相比例是6.5%乙腈，
你先试一试这两种解决方案，如果不行，尝试把A、 ...

1）5针已经呈现这种趋势，我想足以表明这是个问题了
2）可能某针存在没有平衡好的问题，但至少有几针是相似的，而不是呈现一种趋势。
3）方法本身是药典方法，是不用调PH值的，而且采用等度洗脱不太现实

谢谢你的帮助
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9楼2014-08-28 09:55:57
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guoguo306

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xppcomeon at 2014-08-28 09:32:01
看到图了，先问一句流动相混匀了没，第二进样真有气泡没

流动相分A、B泵采用梯度洗脱，不排除是混样器出问题了。进样应该是没气泡的，即使哪针混入了，也不该一直呈现这种趋势啊
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10楼2014-08-28 09:59:16
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guoguo306

新虫 (初入文坛)
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14楼: Originally posted by jixfeng at 2014-08-28 14:29:37
以前用的一直正常？ 那是的柱子不是Agilent SB 的吧？
同意是你的色谱柱效降低所致。6.5%的乙腈，酸性体系SB 柱子耐受根本不行。
曾经走一个拉氧头孢钠 乙酸胺体系（pH 差不多也在4左），5%乙腈梯度体系，也是没几 ...

柱子是agilent SB柱，谢谢你的回答我很受益。
我采取了以下步骤，最终回复了原来的峰型：
1.首先是冲洗柱子，20%乙腈/纯水，40min；20min梯度；100%乙腈40min。
2.对仪器流路进行清洗，依次纯水，5%硝酸溶液（500ml），纯水，甲醇
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16楼2014-08-30 10:10:26
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