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baoyu166

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sunshine436

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没啥特殊的,看看你的感受态细胞做别的正常不,抗性有没有弄错,就是连不上,一般也有载体自连的。

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-08-26 16:25:05
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huyan0817

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-08-26 18:08:32
你说的问题很模糊,不长单克隆原因很多,比如感受太细胞有问题,连接有问题等等!楼主最好做个对照,用质粒验证感受态细胞有问题没有,如果转质粒长出菌了那么很有可能是你连接出问题了!如果质粒都没有出来说明细胞出问题了,那只能重新做细胞.连接问题就分很多种了,可能是你目的片断双梅切不完全,也可能是你连接体系出问题,比如连接酶失活了,目标片断与载体的摩尔比相差太大(一般载体与目的片断为1:3-1:10),连接温度一般16度过夜就可以了!
3楼2014-08-26 16:26:22
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baoyu166

禁虫 (初入文坛)

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4楼2014-08-26 17:06:32
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xm_liu

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-08-26 18:08:42
长不出来菌要么是没连接好,要么是培养基的问题。没连接好可能是1、酶切粘性末端的时候没切出来;2、载体和DNA片段的比例不对;3、连接体系或者连接酶的问题。培养基主要考虑抗性和种类
5楼2014-08-26 17:22:37
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令狐少陈

铜虫 (小有名气)

酶切过夜?
连接4度过夜吧?你切的什么啊
多多交流,海纳百川
6楼2014-08-26 17:38:46
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baoyu166

禁虫 (初入文坛)

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7楼2014-08-27 14:48:01
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