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baoyu166

禁虫 (初入文坛)
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1楼 2014-08-26 16:15:08
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huyan0817

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-08-26 18:08:32
你说的问题很模糊,不长单克隆原因很多,比如感受太细胞有问题,连接有问题等等!楼主最好做个对照,用质粒验证感受态细胞有问题没有,如果转质粒长出菌了那么很有可能是你连接出问题了!如果质粒都没有出来说明细胞出问题了,那只能重新做细胞.连接问题就分很多种了,可能是你目的片断双梅切不完全,也可能是你连接体系出问题,比如连接酶失活了,目标片断与载体的摩尔比相差太大(一般载体与目的片断为1:3-1:10),连接温度一般16度过夜就可以了!
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3楼2014-08-26 16:26:22
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sunshine436

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没啥特殊的，看看你的感受态细胞做别的正常不，抗性有没有弄错，就是连不上，一般也有载体自连的。

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-08-26 16:25:05
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baoyu166

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
4楼2014-08-26 17:06:32
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xm_liu

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-08-26 18:08:42
长不出来菌要么是没连接好，要么是培养基的问题。没连接好可能是1、酶切粘性末端的时候没切出来；2、载体和DNA片段的比例不对；3、连接体系或者连接酶的问题。培养基主要考虑抗性和种类
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5楼2014-08-26 17:22:37
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