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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请问我分别合成了两条基本完全互补的单链，如何将他们合为双链呢？
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草帽小子

银虫 (小有名气)

[求助] 请问我分别合成了两条基本完全互补的单链，如何将他们合为双链呢？ 已有2人参与

请问我分别合成了两条基本完全互补的单链，如何将他们合为双链呢？网上说直接用TE或者水溶，两条单链等摩尔量混匀，PCR 95℃ 3 min，直接关机，让机器自然缓慢降温，来杂交退火。请问体系里面需不需要加酶呢？合成的双链是用来连接用的，有什么的注意事项吗？
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1楼 2014-08-25 12:06:25
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yyy_zzz

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
草帽小子: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2014-08-26 09:02:21
等摩尔混合，可以用水也可以用PCR的缓冲液。不用加酶。退火要慢，链越短越要慢。最好是能用PCR仪慢慢退火，就是做成很多个循环，每个循环降一点，最后到室温。做连接的话，不知道你的具体情况，不好说。不过由于这种链很短，摩尔数很大的，不要加多了。
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2楼2014-08-25 12:19:46
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huyan0817

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
草帽小子(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-25 22:48:34
草帽小子: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-08-26 09:02:36
就是做一个巢式PCR，缓慢退火，72度延伸20秒左右。不需要加酶，P完后最好先连接到T载体上，然后双酶切，再连接到表达载体上面！
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3楼2014-08-25 12:52:40
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闲话寥寥

禁虫
本帖内容被屏蔽
4楼2021-08-05 15:24:25
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