应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请问我分别合成了两条基本完全互补的单链，如何将他们合为双链呢？
41/1返回列表
查看: 1585  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

草帽小子

银虫 (小有名气)

[求助] 请问我分别合成了两条基本完全互补的单链，如何将他们合为双链呢？ 已有2人参与

请问我分别合成了两条基本完全互补的单链，如何将他们合为双链呢？网上说直接用TE或者水溶，两条单链等摩尔量混匀，PCR 95℃ 3 min，直接关机，让机器自然缓慢降温，来杂交退火。请问体系里面需不需要加酶呢？合成的双链是用来连接用的，有什么的注意事项吗？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
海贼王，我当定了
1楼 2014-08-25 12:06:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yyy_zzz

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
草帽小子: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2014-08-26 09:02:21
等摩尔混合，可以用水也可以用PCR的缓冲液。不用加酶。退火要慢，链越短越要慢。最好是能用PCR仪慢慢退火，就是做成很多个循环，每个循环降一点，最后到室温。做连接的话，不知道你的具体情况，不好说。不过由于这种链很短，摩尔数很大的，不要加多了。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2014-08-25 12:19:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huyan0817

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
草帽小子(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-25 22:48:34
草帽小子: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-08-26 09:02:36
就是做一个巢式PCR，缓慢退火，72度延伸20秒左右。不需要加酶，P完后最好先连接到T载体上，然后双酶切，再连接到表达载体上面！
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2014-08-25 12:52:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

闲话寥寥

禁虫
本帖内容被屏蔽
4楼2021-08-05 15:24:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 草帽小子 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭