应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 蛋白质相互作用研究 蛋白A能pull-down蛋白B 反之检测不出
52/1返回列表
查看: 2858  |  回复: 22
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

sakura01_22

木虫 (小有名气)

[求助] 蛋白质相互作用研究 蛋白A能pull-down蛋白B 反之检测不出

如题，在蛋白质相互作用研究中，IP检测，蛋白A能拉下蛋白B，但是蛋白B IP蛋白A时，检测不出。重复3遍左右，依然检测不出，希望哪位虫友能帮忙解答一下。是否存在相互作用只能单方面pull-down的情况，这种情况如何解释？
回复此楼

» 猜你喜欢
心怀希望，放飞梦想！
1楼2014-08-17 11:30:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)
有人还是先去看看免疫共沉淀的实验的原理吧！免疫识别发生在细胞尚未裂解时！！！而后裂解细胞，然后是抗其中一个蛋白质的单抗与其中一个蛋白质发生免疫识别！这步能够使蛋白质变性吗！！？？变性了还免疫识别个鬼呀！除非免疫簇就是序列免疫簇。

煮沸洗脱和WB与这些步骤重叠吗？！还是煮沸洗脱和WB在蛋白质-蛋白质相互作用和免疫识别之前！！？？
图1摘自：Haian Fu edits ,Protein-Protein Interactions:Methods and Applications,Humana Press,2004，339.
蛋白质相互作用研究 蛋白A能pull-down蛋白B 反之检测不出
图1.JPG
赞一下 回复此楼
19楼2014-08-20 12:46:27
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答

dingchaoyue

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sakura01_22(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-17 20:28:26
sakura01_22: 金币+2 2014-08-19 10:34:46
可否用pull-down的方法严重一下b是否可以拉下a？你的那种情况我们组里面有人也出现过那种情况，后来用纯化蛋白用pull down方法解决的，而不是用抗体。当然，还有可能那两蛋白不互作，有a拉b的假阳性。
蛋白互作能否用bifc方法来试试？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
2楼2014-08-17 11:48:47
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sakura01_22(西门吹雪170代发): 金币+4, 鼓励回帖交流 2014-08-17 20:28:38
sakura01_22: 金币+2 2014-08-19 10:34:54
这种情况虽然少见，但却是可以出现的。具体到你的情况：
1、确证用A之抗体Co-IP B的真实性，具体说要有对照（同种属的control IgG对照）。
2、另选一种或几种B的抗体试一试。许多抗体并非适于IP实验，这时只能另选可能用的其他抗体。
3、用其他方法验证A-B间的相互作用（physical interaction），如GST pulldown assays等。
4、可以用mammalian two-hybrid assay在功能上（functional interaction）研究A-B间的相互作用。

Good luck！
赞一下 回复此楼
3楼2014-08-17 12:11:30
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sakura01_22

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dingchaoyue at 2014-08-17 11:48:47
可否用pull-down的方法严重一下b是否可以拉下a？你的那种情况我们组里面有人也出现过那种情况，后来用纯化蛋白用pull down方法解决的，而不是用抗体。当然，还有可能那两蛋白不互作，有a拉b的假阳性。
蛋白互作能否 ...

GST-pull down和BIFC摸索起来都挺费时间的，我本来想用体内试验证明一下二者有相互作用，谁知道出现这种诡异的情况，anyway，谢谢亲的回复！
赞一下 回复此楼
心怀希望，放飞梦想！
4楼2014-08-18 16:50:35
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 SCI英文润色翻译-EnPapers美团队-先修改后付款
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 每次骚扰女学生的都是院系领导，而不是普通教师，小编们要注意措辞正确 +9 zju2000 2024-06-15 11/550 2024-06-16 14:49 by appleapple2
[找工作] 初始合伙人来啦！（生物试剂耗材标准品） +7 欢快的小科研人 2024-06-15 12/600 2024-06-16 14:11 by 水水水中游
[找工作] 杭电、天津科技、青农和宁波工程学院如何选？ +11 味道很好啊 2024-06-13 21/1050 2024-06-16 13:57 by wanglongzh
[论文投稿] 编辑是什么意思 15+3 s090604054 2024-06-15 3/150 2024-06-16 10:29 by bobvan
[硕博家园] 硕博巨婴，也许才刚刚开始 +30 SNaiL1995 2024-06-12 72/3600 2024-06-16 08:34 by 小龙虾biubiubiu
[基金申请] Nature 11日发文，中国著名学者们称造假迫不得已 +5 babu2015 2024-06-14 5/250 2024-06-15 20:40 by lc231001
[论文投稿] 审稿人含糊拒稿，还需要回复吗？如何回复？ 20+3 BruceChum 2024-06-15 17/850 2024-06-15 20:19 by arthas_007
[论文投稿] 投稿时忘记修改一作 +7 gll123456 2024-06-13 11/550 2024-06-15 11:49 by gll123456
[论文投稿] 求机械类四区sci推荐 5+3 迷茫小旷 2024-06-14 4/200 2024-06-15 11:25 by bobvan
[基金申请] 博后基金，以往的结果点不开，怎么回事呢？最后一次机会了，两次都没中前面。 +7 kyukitu 2024-06-14 13/650 2024-06-15 06:46 by 我是王小帅
[论文投稿] 投了一篇4区的SCI，审稿人一个拒稿，一个小修，编辑给了大修。 +9 安稳22123 2024-06-13 10/500 2024-06-14 23:45 by jurkat.1640
[基金申请] 面上基金有一个（两个）C是不是就没戏了.... 5+3 zzzm116 2024-06-13 17/850 2024-06-14 22:26 by lzt8076
[硕博家园] 关于硕博连读的一些疑问？ +4 Lwenter 2024-06-14 4/200 2024-06-14 14:32 by ou0551
[有机交流] ππ堆积会发生在有机溶剂中吗 5+3 zibuyu0420 2024-06-13 4/200 2024-06-14 14:17 by 小肉干
[基金申请] 化学会年会改成一年开一次了？ +5 babu2015 2024-06-12 13/650 2024-06-14 10:46 by babu2015
[基金申请] 连续两年医学口青年项目初审体会 +11 进击的荣耀 2024-06-09 18/900 2024-06-13 17:27 by 进击的荣耀
[有机交流] 原料反应完了，怎么知道是产物还是中间体 +6 小胡在努力 2024-06-11 8/400 2024-06-13 13:33 by 091602
[基金申请] 博后特助这周出结果吗？往年都是啥时候啊？ +13 jsqy 2024-06-12 17/850 2024-06-12 19:55 by Lynn212
[硕博家园] 申博 +3 悦悦小小鱼 2024-06-12 3/150 2024-06-12 15:11 by chen5805
[教师之家] 公办双非，学生论文升学就业都不行。一本大学的论文升学就业没问题吧？ +5 河西夜郎 2024-06-09 5/250 2024-06-10 17:59 by yyallen2003
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭