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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 蛋白质相互作用研究 蛋白A能pull-down蛋白B 反之检测不出
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sakura01_22

木虫 (小有名气)

[求助] 蛋白质相互作用研究 蛋白A能pull-down蛋白B 反之检测不出

如题，在蛋白质相互作用研究中，IP检测，蛋白A能拉下蛋白B，但是蛋白B IP蛋白A时，检测不出。重复3遍左右，依然检测不出，希望哪位虫友能帮忙解答一下。是否存在相互作用只能单方面pull-down的情况，这种情况如何解释？
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心怀希望，放飞梦想！
1楼2014-08-17 11:30:45
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sakura01_22

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dingchaoyue at 2014-08-17 11:48:47
可否用pull-down的方法严重一下b是否可以拉下a？你的那种情况我们组里面有人也出现过那种情况，后来用纯化蛋白用pull down方法解决的，而不是用抗体。当然，还有可能那两蛋白不互作，有a拉b的假阳性。
蛋白互作能否 ...

GST-pull down和BIFC摸索起来都挺费时间的，我本来想用体内试验证明一下二者有相互作用，谁知道出现这种诡异的情况，anyway，谢谢亲的回复！
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心怀希望，放飞梦想！
4楼2014-08-18 16:50:35
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sakura01_22

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-08-17 12:11:30
这种情况虽然少见，但却是可以出现的。具体到你的情况：
1、确证用A之抗体Co-IP B的真实性，具体说要有对照（同种属的control IgG对照）。
2、另选一种或几种B的抗体试一试。许多抗体并非适于IP实验，这时只能另选 ...

谢谢亲的回复，重复过好几遍，确实是真实的，并非假阳性；抗体确实试用于IP,IB等，其余方法也考虑过，但因为在这个小课题上耽误太久，不想再浪费时间，想考虑下是否能从机制上讲清，谢谢交流！
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心怀希望，放飞梦想！
5楼2014-08-18 17:00:22
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sakura01_22

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-08-18 18:42:31
抗体是否合适是个问题，还有2种蛋白的比例。比如2个A就有1个结合B，但是100个B中只有5个结合A。
顺便说一下你这个不叫pull-down。

确实没有考虑过两种蛋白的比例，恩，这种叫CO-IP，一时失误，谢谢指出!
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心怀希望，放飞梦想！
11楼2014-08-19 10:24:49
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sakura01_22

木虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 凌波丽 at 2014-08-19 02:01:11
任何一种实验技术都有系统误差和局限性，很多时候，我们无法去具体解决为什么会如此，但是如果有条件能够深入一些讨论，还是会有不一样的收获。楼主的问题挺有价值！值得讨论！

特别感激亲的回复，我在考虑蛋白相互作用时，一直在考虑间接相互作用，却忽略了蛋白相互作用的基本原理，失误，失误。听亲的一番讲解，才恍然大悟，我再深入去了解一下，再次谢谢亲的解释，希望能多交流！
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心怀希望，放飞梦想！
12楼2014-08-19 10:34:12
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