24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1745  |  回复: 19

jiaoxiayoulu

新虫 (小有名气)

[求助] 载体构建 已有8人参与

各位虫友,最近构建载体出现一个问题:5.8kb左右的双酶切载体连接1.5kb左右的双酶切pcr产物,涂平板后长了几个菌落,当时心情那个激动啊无法言说!之后做了个菌体电泳,心瞬间冻到了冰点:菌体电泳条带显示几个菌落的电泳条带居然比原始载体(原初质粒没有进行酶切的)的要跑得快!!
其中1,2是原始质粒 3,4,5,6是抗性平板上长出菌落的菌体电泳图,为什么会是这种结果呢?载体构建
M3_P]RP{WZO]XGHN64]3F$K.jpg
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈:小木虫仅提供交流平台,不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布,如果其内容涉及到知识产权问题,其责任在于用户本人,如对版权有异议,请联系邮箱:xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : kxy_2014-08-11_22_小时_27_分钟.tif
  • 2014-08-12 08:57:10, 2.72 M

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Hliotrope

木虫 (著名写手)

菌体电泳?什么是菌体电泳?上样口真亮啊。。。
Someone
2楼2014-08-12 10:27:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhxbio

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
jiaoxiayoulu(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-15 12:56:26
真牛!什么叫菌体电泳?正常程序应该是菌落PCR初步鉴定,然后提质粒酶切,条带大小正确,再送测序。
3楼2014-08-12 10:31:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
质粒载体双酶切前是多大?怎么都没有Marker呢?
4楼2014-08-12 10:33:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

还有  你这个菌体电泳是质粒粗提么?
5楼2014-08-12 10:34:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiaoxiayoulu

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Hliotrope at 2014-08-12 10:27:17
菌体电泳?什么是菌体电泳?上样口真亮啊。。。

将菌液用质粒提取试剂盒的试剂1和试剂11初步破壁后是质粒释放出来,让后直接电泳观察条带是否滞后,初步验证是否有外源片段成功连接上载体!
6楼2014-08-12 10:36:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

denverwy123

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
万一 原始载体切下来的片段比1.5K大呢
7楼2014-08-12 10:37:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiaoxiayoulu

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by gaohuihui at 2014-08-12 10:33:37
质粒载体双酶切前是多大?怎么都没有Marker呢?

5880吧
8楼2014-08-12 10:38:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiaoxiayoulu

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by denverwy123 at 2014-08-12 10:37:05
万一 原始载体切下来的片段比1.5K大呢

现在不是酶切问题,关键是克隆子质粒反而比原质粒跑的快一些
9楼2014-08-12 10:44:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xzy0425

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
jiaoxiayoulu(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-15 12:56:40
你细胞破壁厚没有进行其他处理是吧,那你前面的跑得很快的条带就很有可能是宿主菌的DNA。
10楼2014-08-12 12:18:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jiaoxiayoulu 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 304求调剂 +7 castLight 2026-04-16 7/350 2026-04-17 20:05 by 关一盏灯cd
[考研] 一志愿中科大材料与化工,353分还有调剂学校吗 +10 否极泰来2026 2026-04-15 12/600 2026-04-17 17:54 by mapenggao
[教师之家] 山东双非院校考核超级无底线,领导幸灾乐祸,教师遭殃恐 +4 qut2026 2026-04-11 8/400 2026-04-17 16:10 by 会飞的猪157
[考研] 322求调剂 +6 tekuzu 2026-04-17 6/300 2026-04-17 13:48 by Espannnnnol
[考研] 271求调剂 +37 2261744733 2026-04-11 39/1950 2026-04-17 10:11 by 黑科技矿业
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀,最好在一个月之内的,研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 5/250 2026-04-17 10:02 by bobvan
[考研] 322求调剂 +8 123安康 2026-04-12 15/750 2026-04-16 11:07 by Espannnnnol
[考研] 通信工程求调剂!!! +6 zlb770521 2026-04-14 6/300 2026-04-15 20:00 by 学员JpLReM
[考研] 0854调剂 +13 长弓傲 2026-04-12 16/800 2026-04-15 13:45 by fenglj492
[考研] 271求调剂 +35 2261744733 2026-04-11 41/2050 2026-04-14 15:36 by zs92450
[考研] 农学0904 312求调剂 +4 Say Never 2026-04-11 4/200 2026-04-14 09:10 by zs92450
[考研] 305求调剂 +8 玛卡巴卡boom 2026-04-11 8/400 2026-04-14 09:04 by pengliang8036
[考研] 考研英一数一338分 +9 长江大学东校区 2026-04-13 10/500 2026-04-14 00:41 by 王珺璞
[考研] 求调剂,985材料与化工348分 +9 涵竹刘 2026-04-11 14/700 2026-04-13 22:26 by 涵竹刘
[考研] 297工科,求调剂? +13 河南农业大学-能 2026-04-12 13/650 2026-04-13 14:12 by dingyanbo1
[考研] 材料考研调剂 +29 云木达达 2026-04-11 31/1550 2026-04-13 13:32 by lyh鲁老师
[考研] 一志愿085802 323分求调剂 +13 drizzle_9 2026-04-12 14/700 2026-04-13 10:26 by Faiz5552
[考研] 一志愿浙大生物325分求调剂 +9 zysheng 2026-04-12 9/450 2026-04-12 22:31 by yuyin1233
[考研] 331求调剂 +5 王国帅 2026-04-11 5/250 2026-04-11 22:56 by 溪涧流水
[考研] 调剂 +5 文道星台 2026-04-11 5/250 2026-04-11 15:01 by 凯凯要变帅
信息提示
请填处理意见