24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1733  |  回复: 19

jiaoxiayoulu

新虫 (小有名气)

[求助] 载体构建 已有8人参与

各位虫友,最近构建载体出现一个问题:5.8kb左右的双酶切载体连接1.5kb左右的双酶切pcr产物,涂平板后长了几个菌落,当时心情那个激动啊无法言说!之后做了个菌体电泳,心瞬间冻到了冰点:菌体电泳条带显示几个菌落的电泳条带居然比原始载体(原初质粒没有进行酶切的)的要跑得快!!
其中1,2是原始质粒 3,4,5,6是抗性平板上长出菌落的菌体电泳图,为什么会是这种结果呢?载体构建
M3_P]RP{WZO]XGHN64]3F$K.jpg
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈:小木虫仅提供交流平台,不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布,如果其内容涉及到知识产权问题,其责任在于用户本人,如对版权有异议,请联系邮箱:xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : kxy_2014-08-11_22_小时_27_分钟.tif
  • 2014-08-12 08:57:10, 2.72 M

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Hliotrope

木虫 (著名写手)

菌体电泳?什么是菌体电泳?上样口真亮啊。。。
Someone
2楼2014-08-12 10:27:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhxbio

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
jiaoxiayoulu(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-15 12:56:26
真牛!什么叫菌体电泳?正常程序应该是菌落PCR初步鉴定,然后提质粒酶切,条带大小正确,再送测序。
3楼2014-08-12 10:31:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
质粒载体双酶切前是多大?怎么都没有Marker呢?
4楼2014-08-12 10:33:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

还有  你这个菌体电泳是质粒粗提么?
5楼2014-08-12 10:34:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiaoxiayoulu

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Hliotrope at 2014-08-12 10:27:17
菌体电泳?什么是菌体电泳?上样口真亮啊。。。

将菌液用质粒提取试剂盒的试剂1和试剂11初步破壁后是质粒释放出来,让后直接电泳观察条带是否滞后,初步验证是否有外源片段成功连接上载体!
6楼2014-08-12 10:36:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

denverwy123

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
万一 原始载体切下来的片段比1.5K大呢
7楼2014-08-12 10:37:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiaoxiayoulu

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by gaohuihui at 2014-08-12 10:33:37
质粒载体双酶切前是多大?怎么都没有Marker呢?

5880吧
8楼2014-08-12 10:38:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiaoxiayoulu

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by denverwy123 at 2014-08-12 10:37:05
万一 原始载体切下来的片段比1.5K大呢

现在不是酶切问题,关键是克隆子质粒反而比原质粒跑的快一些
9楼2014-08-12 10:44:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xzy0425

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
jiaoxiayoulu(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-15 12:56:40
你细胞破壁厚没有进行其他处理是吧,那你前面的跑得很快的条带就很有可能是宿主菌的DNA。
10楼2014-08-12 12:18:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jiaoxiayoulu 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 269求调剂 +3 跪求收留。 2026-04-04 3/150 2026-04-09 17:49 by wp06
[考研] 269电子信息求调剂,可转专业 +6 独酌wl 2026-04-06 6/300 2026-04-09 17:33 by wp06
[考研] 生物学调剂,一志愿西南大学348,Top期刊一区二作、二区三作,三等奖学金三次 +3 candyyyi 2026-04-09 3/150 2026-04-09 16:15 by 求调剂zz
[考研] 一志愿鲁东大学071000生物学学硕初试分数276求调剂 +3 慕绝cc 2026-04-09 3/150 2026-04-09 09:57 by liuhuiying09
[考研] 二次调剂求老师收留 +3 笑笑袁 2026-04-08 3/150 2026-04-08 23:50 by 醉在风里
[考研] 327求调剂 +12 Xxjc1107. 2026-04-06 12/600 2026-04-08 16:46 by luoyongfeng
[考研] 一志愿郑州大学材料与化工085600,求调剂 +34 吃的不少 2026-04-02 34/1700 2026-04-07 20:01 by lrll?l
[考研] 081700,311,求调剂 +17 冬十三 2026-04-04 18/900 2026-04-07 12:50 by Sammy2
[硕博家园] 0856材料化工求调剂,一志愿211,初试成绩349 +4 江淮北月 2026-04-05 4/200 2026-04-06 22:44 by chenzhimin
[考研] 287求调剂 +3 通信学硕081000 2026-04-03 4/200 2026-04-06 21:03 by going home
[考研] 0817化学工程与技术求调剂,一志愿中海洋319 +14 lv945 2026-04-04 14/700 2026-04-06 10:20 by 蓝云思雨
[考研] 085600,320分求调剂 +16 大馋小子 2026-04-04 17/850 2026-04-06 07:58 by MOF_Catal
[考研] 327求调剂 +4 拾光任染 2026-04-05 4/200 2026-04-05 20:16 by 南航~万老师
[考研] 求调剂到0856材料工程 +3 程9915 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:15 by 蓝云思雨
[考研] 348求调剂 +6 wukira 2026-04-04 6/300 2026-04-05 18:11 by 猪会飞
[考研] 男生,一志愿沪9生物学071000,初试308求调剂 +3 刘墨墨 2026-04-04 3/150 2026-04-05 08:26 by barlinike
[考研] 一志愿0817化学工程与技术,求调剂 +24 我不是只因 2026-04-02 28/1400 2026-04-04 15:15 by dongzh2009
[考研] 325求调剂 +4 春风不借意 2026-04-04 4/200 2026-04-04 14:46 by 湘农储能材料
[考研] 数二英二348求调剂 +4 hxdzj1 2026-04-03 5/250 2026-04-03 21:25 by zhq0425
[考研] 274求调剂 +9 顺理成张 2026-04-03 10/500 2026-04-03 15:10 by 啊俊!
信息提示
请填处理意见