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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 载体构建
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jiaoxiayoulu

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by xzy0425 at 2014-08-12 12:18:20
你细胞破壁厚没有进行其他处理是吧，那你前面的跑得很快的条带就很有可能是宿主菌的DNA。

怎么可能呢，我用提取质粒的试剂盒中的试剂一和试剂二处理了！肯定是质粒条带的！
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11楼2014-08-12 14:23:40
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hululu0725

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
菌体电泳总感觉不精确，电泳速度和太多因素有关系了，菌体PCR P目的基因才是正道啊
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12楼2014-08-12 15:14:51
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xzy0425

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by jiaoxiayoulu at 2014-08-12 14:23:40
怎么可能呢，我用提取质粒的试剂盒中的试剂一和试剂二处理了！肯定是质粒条带的！...

那我就不知道了，不好意思
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13楼2014-08-12 15:49:15
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jiaoxiayoulu

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by hululu0725 at 2014-08-12 15:14:51
菌体电泳总感觉不精确，电泳速度和太多因素有关系了，菌体PCR P目的基因才是正道啊

不会吧！我之前将PCR产物连接T载体，菌体电泳挺好的啊！前面的为连接后的载体，最后是空载体对照
载体构建
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14楼2014-08-12 16:37:24
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Ranen516

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你再换一种方法验证一下！试一试菌PCR！！
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15楼2014-08-12 20:12:45
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jiaoxiayoulu

新虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by Ranen516 at 2014-08-12 20:12:45
你再换一种方法验证一下！试一试菌PCR！！

这个当然了，这个是后续要做的！貌似听说假阳性有时候也可以P出目的条带来
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16楼2014-08-13 08:36:46
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Ranen516

金虫 (正式写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by jiaoxiayoulu at 2014-08-13 08:36:46
这个当然了，这个是后续要做的！貌似听说假阳性有时候也可以P出目的条带来...

哦！！没遇到过！！
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17楼2014-08-13 22:08:54
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chenziping

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
菌落PCR初步鉴定一下，酶切鉴定，然后测序
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18楼2014-08-15 00:57:36
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a50044758

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by jiaoxiayoulu at 2014-08-12 10:36:42
将菌液用质粒提取试剂盒的试剂1和试剂11初步破壁后是质粒释放出来，让后直接电泳观察条带是否滞后，初步验证是否有外源片段成功连接上载体！...

谁教你这样做的啊？
你的质粒都没进行酶切，能判断大小吗？你做菌液PCR吧，比你这个简单，靠谱。
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19楼2014-08-15 17:10:48
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jiaoxiayoulu

新虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by a50044758 at 2014-08-15 17:10:48
谁教你这样做的啊？
你的质粒都没进行酶切，能判断大小吗？你做菌液PCR吧，比你这个简单，靠谱。...

不会吧，同为超螺旋的质粒，分子量越大同样会滞后的啊！这只是初步判定了
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20楼2014-08-18 11:01:29
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