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那个

金虫 (著名写手)

[交流] 生物SEM样品交流 已有2人参与

细胞,细菌的电镜样品越来越多的人涉及,不知道有没有同行可以交流一下。特别是样品冷冻干燥的一些技巧。

生物SEM样品交流
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生物SEM样品交流-1
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生物SEM样品交流-2
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生物SEM样品交流-3
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生物SEM样品交流-4
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我做过细菌的SEM
首先,前期处理非常关键。一般情况下,细菌要做SEM,都是观察其在某表面的分布形态以及结构变化等,那么前期固定过程非常关键。
传统的固定方法是使用0.25%的戊二醛预固定30分钟,再通过2.5%戊二醛固定3-6小时,利用梯度浓度的酒精进行脱水,再进行二氧化碳临界点干燥或非真空冷干后上样。一般需要进行喷金或喷碳处理后才能进行SEM分析。
但是有些样品中戊二醛会与表界面物质发生反应,不适合该方法进行预处理,如果戊二醛固定后脱水,会导致电镜下白色絮状物沉淀过多。那么这样的样品做SEM则需要改用乙酸乙酯进行固定,且酒精脱水应尽可能的减少,否则容易导致样品丢失。如果样品在真空中易变性的话,需要进行环境SEM分析,也就是低真空环境的SEM。(有环扫仪器的话才能做)
2楼2014-08-12 12:17:28
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kali509

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by snoopytbw at 2014-08-12 12:17:28
我做过细菌的SEM
首先,前期处理非常关键。一般情况下,细菌要做SEM,都是观察其在某表面的分布形态以及结构变化等,那么前期固定过程非常关键。
传统的固定方法是使用0.25%的戊二醛预固定30分钟,再通过2.5%戊二 ...

你好 目前没有实验条件做临界干燥,请问酒精脱水后自然干燥可以吗?
3楼2015-06-08 17:40:37
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by kali509 at 2015-06-08 17:40:37
你好 目前没有实验条件做临界干燥,请问酒精脱水后自然干燥可以吗?...

看你做什么菌,如果该菌EPS不发育的话,最好不要用酒精。。。EPS胞外聚合物。
以前有人用的乙酸乙酯干燥的。效果略好
4楼2015-06-09 09:56:47
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kali509

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by snoopytbw at 2015-06-09 09:56:47
看你做什么菌,如果该菌EPS不发育的话,最好不要用酒精。。。EPS胞外聚合物。
以前有人用的乙酸乙酯干燥的。效果略好...

就是如果有EPS的话,比如观察生物膜biofilm,可以用酒精梯度脱水后自然干燥。
5楼2015-06-09 13:57:59
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