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本人做鱼蛋白肽的，最近做时间单因素，研究水解时间对木瓜蛋白酶水解鱼蛋白水解度的影响，本来设定的时间是1-5h，中间每个点间隔一个小时，发现水解度没有变化，又做10min，20min,30min发现水解度还是没有变化，而且数值跟之前的数值相近，现在做5min,10min的发现水解度还是不变。遂将加酶量调整为原来的十分之一，继续试验，做了5min,10min，30min三个水解时间对水解度的影响，还是没有变化，我要崩溃了，我不知道增么办了，跪求高人指点啊啊啊啊啊！！！！ |
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【答案】应助回帖
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瑞兹05: 金币+8, ★★★很有帮助 2014-08-08 15:37:58
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| 恕我直言，你的思考方式就有问题，首先你做1-5h，中间每个点间隔一个小时，如果检测方法是正确的，发现水解度没有变化，这表明你的蛋白在5h还根本就没有水解，你再做更小时间点的水解，属于做无用功，根本更不可能水解，这个时候，你应该考虑酶活的问题，可以调节一下各个参数，如温度、pH（所用缓冲液）、底物浓度、激活离子浓度、酶的用量以及反应时间，前面三个是做酶反应时最常考虑的三个因素；另外测定多台是否水解可以用HPLC的方式更为简单，用210和280nm双波长，C18色谱柱，流动相水/甲醇梯度洗脱，这样更为直观，而且容易定量。希望实验顺利。 |
5楼2014-08-08 00:50:10
