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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » 急求解答！！
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瑞兹05

新虫 (初入文坛)

[求助] 急求解答！！ 已有4人参与

本人做鱼蛋白肽的，最近做时间单因素，研究水解时间对木瓜蛋白酶水解鱼蛋白水解度的影响，本来设定的时间是1-5h，中间每个点间隔一个小时，发现水解度没有变化，又做10min，20min,30min发现水解度还是没有变化，而且数值跟之前的数值相近，现在做5min,10min的发现水解度还是不变。遂将加酶量调整为原来的十分之一，继续试验，做了5min,10min，30min三个水解时间对水解度的影响，还是没有变化，我要崩溃了，我不知道增么办了，跪求高人指点啊啊啊啊啊！！！！
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1楼 2014-08-07 15:24:18
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瑞兹05

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小毛孩24 at 2014-08-07 16:35:48
lz的水解度是怎么测定的？对照测了吗？
水解度没有变化，估计是没有水解吧

采用茚三酮法测定的水解度，对照测了，应该是水解了，因为反应5min的水解度与反应3h的水解度数值非常接近为8.3%上下，也怀疑过没有水解的问题，后来将酶加入底物后放置在水浴中灭活，直接测定的水解度为6.8%，但是在相同条件下先将酶灭活再加入到底物中测定的水解度仅为4.7%，因此我断定应该是反应了
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3楼2014-08-07 18:45:25
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小毛孩24

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
瑞兹05: 金币+2, ★有帮助 2014-08-09 13:08:52
lz的水解度是怎么测定的？对照测了吗？
水解度没有变化，估计是没有水解吧
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2楼2014-08-07 16:35:48
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huaxiu

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
瑞兹05: 金币+2, ★有帮助 2014-08-09 13:08:59
是不是蛋白酶失活了，酶活侧过吗
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不要让你的梦想只是梦想而已。
4楼2014-08-07 23:43:53
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liweixiaoye

至尊木虫 (著名写手)

正股级巡视员

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
瑞兹05: 金币+8, ★★★很有帮助 2014-08-08 15:37:58
恕我直言，你的思考方式就有问题，首先你做1-5h，中间每个点间隔一个小时，如果检测方法是正确的，发现水解度没有变化，这表明你的蛋白在5h还根本就没有水解，你再做更小时间点的水解，属于做无用功，根本更不可能水解，这个时候，你应该考虑酶活的问题，可以调节一下各个参数，如温度、pH（所用缓冲液）、底物浓度、激活离子浓度、酶的用量以及反应时间，前面三个是做酶反应时最常考虑的三个因素；另外测定多台是否水解可以用HPLC的方式更为简单，用210和280nm双波长，C18色谱柱，流动相水/甲醇梯度洗脱，这样更为直观，而且容易定量。希望实验顺利。
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人生短短几个秋，不醉不罢休！
5楼2014-08-08 00:50:10
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