[交流] 细菌的氧化应激（ROS）测定 已有2人参与

各位大牛，近期看到一个有关 CuI 对大肠杆菌ROS的实验，看后有些狐疑，因为最近也在做这方面的研究，故将该方法拿出来，讨论一下： 这个人的方法是： 将不同浓度的CuI 溶液加入到 事先备好的大肠杆菌的HBSS溶液中，光照30分钟后滴入HCl 终止反应，测试溶液在575nm处的OD值，OD值越大，说明CuI产生的ROS的量就越高。 并注明说，NBT一种细菌的碱性磷酸酶底物，可以被细菌的碱性磷酸酶催化，形成不溶性的蓝色产物；所以正常情况下，细菌会将溶液中的NBT催化，而加入CuI的菌液中，因为CuI会产生ROS，杀死部分细菌，故而致使NBT的催化率降低，以至于溶液中仍有大量NBT剩余，所以在OD575nm处，仍有很高的OD值。从而得以判断，CuI的浓度与其产生的ROS量的关系。        从他的方法可以得出1点结论就是：NBT在575nm处是应该有吸收峰的，不然这个实验前提就不成立，而事实上，我用uV-Vis测试，发现NBT的峰不仅不在575nm处，而且有多个峰（如下图）。       另外，通过进一步查阅资料发现，NBT是一种能和超氧自由基反应，生成蓝色沉淀的物质，该蓝色沉淀在560nm处有吸收峰。所以正确的实验方法是否是这样才对： 第一步：不同浓度 CuI + 菌 + HBSS，光照30分钟，加HCl 终止 第二步：离心，得到蓝色沉淀，然后加入HBSS 测 OD560 的值。 这样OD值越大，则超氧自由基浓度就越大，ROS反应就跟剧烈。 这样做原理上对不对呢？ NBT1.jpg

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