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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 细菌OD值的测定
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masihong

金虫 (小有名气)

[求助] 细菌OD值的测定

请教各位，细菌的OD值到底怎么测啊？我现在想扫一下全波长，先确定一下细菌在哪个波长下测吸光度，可是为什么没有出现特征吸收峰呢？还是就按文献上的测OD600？我想用水做参比，然后将菌体离心洗涤，这样处理了三次，然后将菌体稀释十倍，但是这样测出的跟基线没什么区别，是不是在处理菌体的时候把细菌给稀释没了啊？因为我是外行，现在刚接触生物这块，希望得到大家的耐心指导，谢谢！在用营养液做参比的时候，测出在246nm波长下出了一个峰，但是不确定以后是不是就在这个波长下测，并且用营养液作参比感觉太浪费了。
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笑天涯
1楼 2011-09-24 21:21:33
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
masihong(金币+5): 2011-09-25 17:53:01
rainwander(金币+1): 鼓励交流 2011-09-25 20:11:15
如果你是直接测液体培养基摇的的菌的话那就OD600，用没接菌的无菌培养基作对照，如果你是离心后用其他液体重悬的话那就用空白的悬浮液作对照
你做的246nm可能是培养基的吸收峰吧，不是菌的吸收峰，正经细菌浓度的波长就是OD600
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显微镜下的世界很精彩！
2楼2011-09-24 22:04:00
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quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
masihong(金币+5): 2011-09-25 17:52:56
rainwander(金币+2): 鼓励交流 2011-09-25 20:11:32
WLS是正确的，但是你应该选择不同稀释度，都做WLS，然后看看那个值是能够和菌体浓度相关的。
有的时候，特征吸收峰和菌体生理状态有关，如色素组成或者某种代谢物的产生，而不是同菌体相关的。
如果是单细胞的菌体，OD600的吸收一般都是可以的，除非你的材料在这个地方有特异性吸收。
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致良知
3楼2011-09-24 22:33:23
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masihong

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by asznpb at 2011-09-24 22:04:00:
如果你是直接测液体培养基摇的的菌的话那就OD600，用没接菌的无菌培养基作对照，如果你是离心后用其他液体重悬的话那就用空白的悬浮液作对照
你做的246nm可能是培养基的吸收峰吧，不是菌的吸收峰，正经细菌浓度的 ...

那我就在600波长下测了？关键我想看看600到底有没有峰，但是做了几次样总是没出峰，是不是不用管出峰不出峰，直接测就可以啊？
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笑天涯
4楼2011-09-26 09:14:38
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masihong

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by quiller2000 at 2011-09-24 22:33:23:
WLS是正确的，但是你应该选择不同稀释度，都做WLS，然后看看那个值是能够和菌体浓度相关的。
有的时候，特征吸收峰和菌体生理状态有关，如色素组成或者某种代谢物的产生，而不是同菌体相关的。
如果是单细胞的菌 ...

关键我一开始是离心收集的菌体，但是收集到的太少了，然后分别稀释了10倍和100倍，测出来的吸光度非常小，并且也没有找到特征吸收峰，怎么办呢？我还是直接测OD600，不扫全波长得到最大吸收峰了？
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笑天涯
5楼2011-09-26 09:20:52
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quiller2000

木虫 (著名写手)
OK，你可以分时间取样，比如接种后1,2,4,6,8,10h取样，每次做一次WLS，这样一比较就可以了
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致良知
6楼2011-09-26 12:59:22
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zhouke123

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
7楼2012-02-21 14:45:16
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小子的饭桶

金虫 (正式写手)

a wave in the ocean,the lig

引用回帖:
7楼: Originally posted by zhouke123 at 2012-02-21 14:45:16:
你好，我想问一下，就是测菌液密度的时候测OD600，用培养基做空白对照，菌液稀释的话，对照需要稀释吗？？

如果你用培养基稀释菌液的话，用培养基稀释培养基就没必要了吧；如果不是用培养基稀释，那对照肯定也要做相应的处理，否者对照就没太大的意义了吧
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8楼2012-03-10 21:06:50
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