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whb21

木虫 (著名写手)

[求助] 重组蛋白免疫动物制备单抗 已有6人参与

如题,最近在做重组蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体,有一些重组蛋白是包涵体形式表达的,请问各位大神,这样的蛋白做免疫的话效果如何?尝试过包涵体变性复性,结果免疫失败,请各位大神给点建议,多谢多谢!
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lh200346

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

还有就是你的免疫程序如何?有没有使用佐剂?目的蛋白的免疫剂量是多少?这些都与免疫结果有关。不一定是你的蛋白不行!
14楼2014-08-11 17:00:50
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普通回帖

gu666hong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
whb21(youlinglyw代发): 金币+3, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2014-08-05 09:46:38
你变性复性怎么做的,刚歹说下啊,为什么会失败?做western blot了?

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-08-04 22:12:23
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
whb21(youlinglyw代发): 金币+5, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2014-08-05 09:46:53
你不会是在说直接用包涵体粉碎后去免疫动物吧?粉碎后的包涵体的抗原免疫簇(如果真的存在的 话)那可也是与天然状态的蛋白质的抗原免疫簇完全不同的。
3楼2014-08-05 02:15:31
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
youlinglyw: 金币+5, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2014-08-05 09:47:01
whb21: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2014-08-07 19:45:56
另外,包涵体的变性复性有一系列的实验流程,不是随便一做就行的。我提供给你一个包涵体提纯、变性和复性的实验流程,请自行参考。具体问题可以再讨论。

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  • 附件 1 : Purificationofinclusionbodiesandrefoldingofproteins.pdf
  • 2014-08-05 02:25:03, 93.73 K
4楼2014-08-05 02:18:49
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whb21

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gu666hong at 2014-08-04 22:12:23
你变性复性怎么做的,刚歹说下啊,为什么会失败?做western blot了?

我用6M盐酸胍将蛋白变性,采取透析复性方法,拿到了可溶性蛋白,但复性缓冲液中含有0.5M的盐酸胍,电泳显示有明显的目的蛋白条带,使用复性后的溶液去免疫小鼠,检查小鼠血清,未见到抗体产生......
5楼2014-08-07 19:44:47
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whb21

木虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 凌波丽 at 2014-08-05 02:18:49
另外,包涵体的变性复性有一系列的实验流程,不是随便一做就行的。我提供给你一个包涵体提纯、变性和复性的实验流程,请自行参考。具体问题可以再讨论。

多谢多谢,我首先拿到包涵体,用6M盐酸胍将其溶解,采用透析复性方法拿到可溶性蛋白,SDS-PAGE能够检测到目的蛋白,且纯度>90%,复性液中含有0.5M盐酸胍,接着用PBS稀释复性蛋白进行小鼠免疫,3周后取血检测血清,结构无抗体产生......麻烦专家给分析分析,十分感谢
6楼2014-08-07 19:50:54
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llfxcy

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

做抗体不能在一棵树上吊死

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2014-08-08 00:11:36
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whb21

木虫 (著名写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by llfxcy at 2014-08-08 00:11:36
做抗体不能在一棵树上吊死

请问能具体点吗?
8楼2014-08-09 21:33:16
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llfxcy

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by whb21 at 2014-08-09 21:33:16
请问能具体点吗?...

多做几个片段,有备无患

[ 发自小木虫客户端 ]
9楼2014-08-09 21:44:42
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maweisimple

铁虫 (小有名气)

缘分呀王同学,在这碰到你,你有这么多金币呀
Ifyouwantsomething,setitfree.Ifitcomesback,itisyours.Ifitdoesn't,itisnever.
10楼2014-08-11 15:34:42
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