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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » 重组蛋白免疫动物制备单抗
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whb21

木虫 (著名写手)

[求助] 重组蛋白免疫动物制备单抗 已有6人参与

如题，最近在做重组蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体，有一些重组蛋白是包涵体形式表达的，请问各位大神，这样的蛋白做免疫的话效果如何？尝试过包涵体变性复性，结果免疫失败，请各位大神给点建议，多谢多谢！
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1楼 2014-08-04 22:01:25
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lh200346

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

还有就是你的免疫程序如何？有没有使用佐剂？目的蛋白的免疫剂量是多少？这些都与免疫结果有关。不一定是你的蛋白不行！
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14楼2014-08-11 17:00:50
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普通回帖

gu666hong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
whb21(youlinglyw代发): 金币+3, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-08-05 09:46:38
你变性复性怎么做的，刚歹说下啊，为什么会失败？做western blot了？

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2楼2014-08-04 22:12:23
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
whb21(youlinglyw代发): 金币+5, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-08-05 09:46:53
你不会是在说直接用包涵体粉碎后去免疫动物吧？粉碎后的包涵体的抗原免疫簇（如果真的存在的 话）那可也是与天然状态的蛋白质的抗原免疫簇完全不同的。
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3楼2014-08-05 02:15:31
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
youlinglyw: 金币+5, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-08-05 09:47:01
whb21: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2014-08-07 19:45:56
另外，包涵体的变性复性有一系列的实验流程，不是随便一做就行的。我提供给你一个包涵体提纯、变性和复性的实验流程，请自行参考。具体问题可以再讨论。
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  • 附件 1 : Purificationofinclusionbodiesandrefoldingofproteins.pdf
    • 2014-08-05 02:25:03, 93.73 K
4楼2014-08-05 02:18:49
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whb21

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gu666hong at 2014-08-04 22:12:23
你变性复性怎么做的，刚歹说下啊，为什么会失败？做western blot了？

我用6M盐酸胍将蛋白变性，采取透析复性方法，拿到了可溶性蛋白，但复性缓冲液中含有0.5M的盐酸胍，电泳显示有明显的目的蛋白条带，使用复性后的溶液去免疫小鼠，检查小鼠血清，未见到抗体产生......
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5楼2014-08-07 19:44:47
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whb21

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 凌波丽 at 2014-08-05 02:18:49
另外，包涵体的变性复性有一系列的实验流程，不是随便一做就行的。我提供给你一个包涵体提纯、变性和复性的实验流程，请自行参考。具体问题可以再讨论。

多谢多谢，我首先拿到包涵体，用6M盐酸胍将其溶解，采用透析复性方法拿到可溶性蛋白，SDS-PAGE能够检测到目的蛋白，且纯度>90%，复性液中含有0.5M盐酸胍，接着用PBS稀释复性蛋白进行小鼠免疫，3周后取血检测血清，结构无抗体产生......麻烦专家给分析分析，十分感谢
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6楼2014-08-07 19:50:54
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llfxcy

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

做抗体不能在一棵树上吊死

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7楼2014-08-08 00:11:36
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whb21

木虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by llfxcy at 2014-08-08 00:11:36
做抗体不能在一棵树上吊死

请问能具体点吗？
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8楼2014-08-09 21:33:16
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llfxcy

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by whb21 at 2014-08-09 21:33:16
请问能具体点吗？...

多做几个片段，有备无患

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9楼2014-08-09 21:44:42
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maweisimple

铁虫 (小有名气)
缘分呀王同学，在这碰到你，你有这么多金币呀
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Ifyouwantsomething,setitfree.Ifitcomesback,itisyours.Ifitdoesn't,itisnever.
10楼2014-08-11 15:34:42
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