应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » 重组蛋白免疫动物制备单抗
151/2返回列表12下一页
查看: 3014  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

whb21

木虫 (著名写手)

[求助] 重组蛋白免疫动物制备单抗 已有6人参与

如题，最近在做重组蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体，有一些重组蛋白是包涵体形式表达的，请问各位大神，这样的蛋白做免疫的话效果如何？尝试过包涵体变性复性，结果免疫失败，请各位大神给点建议，多谢多谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-08-04 22:01:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lh200346

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

还有就是你的免疫程序如何？有没有使用佐剂？目的蛋白的免疫剂量是多少？这些都与免疫结果有关。不一定是你的蛋白不行！
赞一下(1人) 回复此楼
14楼2014-08-11 17:00:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

gu666hong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
whb21(youlinglyw代发): 金币+3, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-08-05 09:46:38
你变性复性怎么做的，刚歹说下啊，为什么会失败？做western blot了？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
2楼2014-08-04 22:12:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
whb21(youlinglyw代发): 金币+5, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-08-05 09:46:53
你不会是在说直接用包涵体粉碎后去免疫动物吧？粉碎后的包涵体的抗原免疫簇（如果真的存在的 话）那可也是与天然状态的蛋白质的抗原免疫簇完全不同的。
赞一下 回复此楼
3楼2014-08-05 02:15:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
youlinglyw: 金币+5, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-08-05 09:47:01
whb21: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2014-08-07 19:45:56
另外，包涵体的变性复性有一系列的实验流程，不是随便一做就行的。我提供给你一个包涵体提纯、变性和复性的实验流程，请自行参考。具体问题可以再讨论。
赞一下 回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : Purificationofinclusionbodiesandrefoldingofproteins.pdf
    • 2014-08-05 02:25:03, 93.73 K
4楼2014-08-05 02:18:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

whb21

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gu666hong at 2014-08-04 22:12:23
你变性复性怎么做的，刚歹说下啊，为什么会失败？做western blot了？

我用6M盐酸胍将蛋白变性，采取透析复性方法，拿到了可溶性蛋白，但复性缓冲液中含有0.5M的盐酸胍，电泳显示有明显的目的蛋白条带，使用复性后的溶液去免疫小鼠，检查小鼠血清，未见到抗体产生......
赞一下 回复此楼
5楼2014-08-07 19:44:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

whb21

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 凌波丽 at 2014-08-05 02:18:49
另外，包涵体的变性复性有一系列的实验流程，不是随便一做就行的。我提供给你一个包涵体提纯、变性和复性的实验流程，请自行参考。具体问题可以再讨论。

多谢多谢，我首先拿到包涵体，用6M盐酸胍将其溶解，采用透析复性方法拿到可溶性蛋白，SDS-PAGE能够检测到目的蛋白，且纯度>90%，复性液中含有0.5M盐酸胍，接着用PBS稀释复性蛋白进行小鼠免疫，3周后取血检测血清，结构无抗体产生......麻烦专家给分析分析，十分感谢
赞一下 回复此楼
6楼2014-08-07 19:50:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

llfxcy

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

做抗体不能在一棵树上吊死

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
7楼2014-08-08 00:11:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

whb21

木虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by llfxcy at 2014-08-08 00:11:36
做抗体不能在一棵树上吊死

请问能具体点吗？
赞一下 回复此楼
8楼2014-08-09 21:33:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

llfxcy

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by whb21 at 2014-08-09 21:33:16
请问能具体点吗？...

多做几个片段，有备无患

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
9楼2014-08-09 21:44:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

maweisimple

铁虫 (小有名气)
缘分呀王同学，在这碰到你，你有这么多金币呀
赞一下 回复此楼
Ifyouwantsomething,setitfree.Ifitcomesback,itisyours.Ifitdoesn't,itisnever.
10楼2014-08-11 15:34:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 whb21 的主题更新
151/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 C79jjtjAKjEn 2026-09-15 4/200 2026-09-18 06:44 by manzzl
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 4/200 2026-09-18 01:54 by cITaGg3p5edr
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +7 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 7/350 2026-09-17 22:53 by cuPZTDXS3VOd
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 3/150 2026-09-17 15:29 by 0ngsZVSCTS7z
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 23jxep3nCNZb 2026-09-14 4/200 2026-09-17 13:51 by ObVzqQQh1rrE
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 23jxep3nCNZb 2026-09-14 5/250 2026-09-17 13:29 by ObVzqQQh1rrE
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +6 23jxep3nCNZb 2026-09-14 6/300 2026-09-17 13:29 by ObVzqQQh1rrE
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-17 12:39 by ObVzqQQh1rrE
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 6/300 2026-09-17 12:29 by ObVzqQQh1rrE
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-17 03:52 by k06BKNblrGRH
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 6/300 2026-09-17 03:04 by Tql5LQhh5rLK
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 7/350 2026-09-17 02:14 by Tql5LQhh5rLK
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 23jxep3nCNZb 2026-09-14 4/200 2026-09-16 21:03 by MHf40yA0Uhyb
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 6/300 2026-09-16 16:00 by i3KBRD19ERkG
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-16 03:14 by DgNGHc3h5tPl
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-16 02:50 by DgNGHc3h5tPl
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +7 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 8/400 2026-09-16 02:23 by DgNGHc3h5tPl
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +7 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 7/350 2026-09-15 16:23 by CgyNCDVNhGVg
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-15 14:58 by CgyNCDVNhGVg
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:26 by C79jjtjAKjEn
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭