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Phoebe.Lee

金虫 (小有名气)

。。。

[求助] PCR求指点 已有35人参与

自己设计的引物扩增基因编码区序列
上游引物:  CCGGAATTC ATGGCCGCGCAGCTGCTGGAGG                 
下游引物：CGCGTCGA CTCAGCTGAGCACCTCTTCCTGGGGC      
加了酶切位点和保护碱基   
引物合成订单给出的tm值分别为65.9和67.8（Tm (50mM Na+) )

做了温度梯度56-64
反应条件：35个循环  Takara  Taq酶   目的片段1600左右
                  94       5min
                  94        30s
                  56-64   30s
                  72        2min
                  72        10min
PCR跑胶结果如图，求大神指点

PCR求指点
jiaotu.jpg
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岁月静好
1楼 2014-08-04 17:03:01
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

冉兆星

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
Phoebe.Lee(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-08 09:29:04
从Marker上看，在1600bp隐隐约约有条带，如果引物的特异性没有问题的话，你把退火温度提高到66-67℃试试，祝好！
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2014-08-04 20:33:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

pzx1004
★
Phoebe.Lee(金币+1): 谢谢参与
祝福

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-08-04 17:07:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

12305045
3楼2014-08-04 17:29:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chyzm

铁杆木虫 (职业作家)
祝福你
4楼2014-08-04 17:43:59
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chyzm

铁杆木虫 (职业作家)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2014-08-04 19:41:04
我不太懂，不是说回复就有金币么？
赞一下 回复此楼
5楼2014-08-04 17:44:25
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aabuzhangjun

新虫 (知名作家)
祝福，祈福，愿楼主今后一切顺利，愿自己及女朋友工作顺利，祈福！
赞一下 回复此楼
6楼2014-08-04 17:54:54
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tzynew
7楼2014-08-04 17:58:11
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yaoyao145
8楼2014-08-04 18:14:55
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假大空
9楼2014-08-04 18:42:29
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