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被占了

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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Phoebe.Lee(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-08 09:30:39
退火温度就用58度。如果是扩增基因的话，模版用的是 cDNA么？确定模版是有用的？ 我用的是诺唯赞公司的phanta 高保真酶mix ，你可以试试

[ 发自小木虫客户端 ]
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没有等出来的辉煌，只有做出来的成功。
51楼2014-08-06 03:18:31
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zhifangli

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
Phoebe.Lee(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-08 09:30:49
引物貌似不太合适，特异性不高，建议重新设计，Primer-BLAST很好用
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52楼2014-08-06 08:24:10
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646510580
53楼2014-08-06 10:27:50
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wszl666

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
请问，是用什么模板扩增的？
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基因敲除
54楼2014-08-06 11:10:42
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a50044758

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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Phoebe.Lee(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-08 09:31:02
建议加终浓度1%的DMSO，如果不想建议换酶P，Taq酶适合短片段的PCR，你可以试试LA Taq或者其他酶。
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55楼2014-08-07 15:26:13
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杨仔

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

弱弱的说一句，你的引物在我们这都可以72℃两步法退火延伸了。你的结果也明显反映出了退火温度低、特异性差的问题了。
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56楼2014-08-07 17:15:53
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青烟素雨

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

maker跑的很清晰，但是样品浓度似乎小了一点。从图上看，似乎maker选择的不是十分合理哦。建议可以同时点两个maker，或者换一个。个人建议哈，做的也不是很多。希望对你有效
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57楼2014-08-07 17:59:16
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yangnan1987

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
Phoebe.Lee(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-08 09:31:37
Marker带很亮证明胶没有问题，而PCR产物杂带很多，说明设计的PCR引物特异性不强，建议你把退火温度提高到65-72℃试试，如果还不能成功，就需要从新设计引物了。
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58楼2014-08-07 23:52:36
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mzhyan
59楼2014-08-08 10:12:18
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Phoebe.Lee

金虫 (小有名气)

。。。
引用回帖:
58楼: Originally posted by yangnan1987 at 2014-08-07 23:52:36
Marker带很亮证明胶没有问题，而PCR产物杂带很多，说明设计的PCR引物特异性不强，建议你把退火温度提高到65-72℃试试，如果还不能成功，就需要从新设计引物了。

嗯，谢谢

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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岁月静好
60楼2014-08-08 23:09:51
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